摘要：为了筛选黑豆蛋白中具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的肽段，采用双酶复合水解法酶解黑豆蛋白制备α-葡萄糖苷酶抑制肽，并通过超滤、液相色谱-串联质谱和分子对接技术对黑豆蛋白α-葡萄糖苷酶抑制肽进行分离、鉴定和筛选，最后验证其体外活性。结果表明，利用中性蛋白酶酶解180 min后再用碱性蛋白酶酶解180 min，制得的黑豆蛋白酶解物浓度为2 mg/mL时α-葡萄糖苷酶抑制率为45.81%±0.51%。酶解物经超滤后，其中Ⅰ组（＜1 kDa）浓度为2 mg/mL时α-葡萄糖苷酶抑制率高达81.29%±1.11%。在Ⅰ组分中鉴定并筛选出了1条溶解性好、无毒、无致敏性且未曾被报道过的α-葡萄糖苷酶抑制肽KGLF（Lys-Gly-Leu-Phe），该肽与α-葡萄糖苷酶的对接结合能为-3.69 kcal/mol，经体外验证其IC50值为5.26×10-3 mg/mL，显著（P<0.05）低于黑豆蛋白酶解液Ⅰ组。综上，本研究通过双酶复合水解黑豆蛋白成功制备并筛选高活性降糖肽，可以为黑豆深加工和制备高附加值的功能性产品提供理论依据。
文章目录
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
1.2 实验方法
1.2.1 黑豆蛋白酶解物的制备
1.2.2 蛋白酶复合水解黑豆蛋白顺序的确定
1.2.3 黑豆肽的分离纯化
1.2.4 分子量测定
1.2.5 氨基酸含量检测
1.2.6 LC-MS/MS鉴定黑豆蛋白肽的氨基酸序列
1.2.7 黑豆蛋白肽的筛选
1.2.8 分子对接
1.2.9 水解度测定
1.2.10 α-葡萄糖苷酶抑制率的测定
1.3数据处理
2 结果与分析
2.1 黑豆蛋白酶解物的制备
2.2 双酶复合水解黑豆蛋白试验
2.3 黑豆蛋白酶解物分子量分布分析
2.4 黑豆蛋白酶解物超滤后各组分活性分析
2.5 黑豆蛋白酶解物Ⅰ组分氨基酸含量分析
2.6 黑豆蛋白肽生物活性及理化性质评估
2.7 黑豆蛋白肽与α-葡萄糖苷酶分子对接结果分析
2.8 黑豆蛋白肽对α-
