摘要:目的 本实验旨在通过AIM2-caspase-1/caspase-11-GSDMD焦亡信号通路探讨解毒化瘀颗粒(JDHY)调控急性肝衰竭(ALF)细胞凋亡发挥保护肝细胞的潜在作用机制。方法 实验采用D-氨基半乳糖(D-GalN)联合脂多糖(LPS)腹腔注射诱导C57BL/6小鼠急性肝衰竭模型,将30只小鼠随机分为正常组(Control)、模型组(Model)和解毒化瘀颗粒组(JDHY),每组10只。JDHY组小鼠在造模前72小时开始给予JDHY灌胃(一天两次,0.4mL/次),模型组及正常组给予同体积双蒸水灌胃,造模后6小时眼眶采血并留取肝组织样本。采用全自动生化分析仪检测肝功能指标(ALT、AST、TBIL),苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化,免疫组化检测肝组织中AIM2、GSDMD表达,蛋白免疫印迹法(Westernblot,WB)检测肝组织中AIM2、caspase-1、caspase-11、GSDMD及GSDMD-N蛋白表达,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析肝组织中AIM2、caspase-1、caspase-11、GSDMDmRNA表达,ELISA检测肝组织细胞因子IL-1β、IL-18表达。结果 与模型组相比,JDHY组小鼠血清ALT、AST和TBIL水平下降(P<0.05),肝组织坏死和炎症细胞浸润减轻,肝组织中AIM2、GSDMD表达减少,Westernblot和RT-PCR结果表明,JDHY组小鼠肝组织中AIM2、caspase-1、caspase11、GSDMD及GSDMD-N的表达明显下调(P<0.05),ELISA检测炎症细胞因子IL-1β、IL-18表达水平减少(P<0.05)。研究结果表明,JDHY通过下调AIM2-caspase-1/caspase-11-GSDMD信号通路的过度激活,有效减轻了肝细胞焦亡和炎症反应,改善了急性肝衰竭的肝功能损伤。结论 解毒化瘀颗粒能够通过调控AIM2-caspase1/caspase11-GSDMD焦亡信号通路,抑制肝细胞焦亡,显著缓解D-GalN/LPS诱导的急性肝衰竭,为ALF的治疗提供了潜在的中药干预机制和理论支持。
文章目录
1 材料与方法
1.1 实验动物与分组
1.2实验药物与试剂
1.2.1实验药物
1.2.2主要试剂
1.3仪器
2 实验方法
2.1造模、给药与标本采集
2.2指标检测
2.2.1肝功能指标检测
2.2.2 肝组织中HE染色及GSDMD、AIM2表达检测
2.2.3肝组织中GSDMD、GSDMD-N、AIM2、Caspase1和Caspase11蛋白表达检测
2.2.4 肝细胞GSDMD、AIM2、Caspase1和Caspase11 mRNA表达检测
2.2.5 肝组织IL-18、IL-1β表达检测
2.3 统计学方法
3 结果
3.1 解毒化瘀颗粒对ALF小鼠肝功能的影响
3.2 解毒化瘀颗粒对ALF小鼠肝组织病理变化的影响
3.3 解毒化瘀颗粒对ALF小鼠肝组织AIM2、GSDMD表达的影响
3.4 解毒化瘀颗粒对ALF小鼠肝组织GSDMD、GSDMD-N、AIM2、Caspase-1和Caspase-11蛋白表达的影响
3.5 解毒化瘀颗粒对ALF小