摘要：目的：研究牛黄清心丸（NHQXW）通过维持血脑屏障（BBB）的完整性进而改善痰热腑实型脑出血的作用，并探讨其可能的机制。方法：连续3 d灌胃小鼠15%的自体粪便模拟自发的痰热腑实证候，第4天进行胶原酶诱导脑出血的手术。将模型小鼠随机分为7组：假手术组（Sham），假手术+给药组（Sham + NHQXW-H），胶原酶诱导脑出血组（Collagenase），痰热腑实型脑出血组（Collagenase + Feces），牛黄清心丸低(NHQXW-L， 0.225 g·kg-1)、中(NHQXW-M， 0.45 g·kg-1)、高(NHQXW-H， 0.90 g·kg-1)剂量组。术后连续给药3 d后再进行实验检测，以粪便含水量和小肠碳墨推进率为指标考察NHQXW改善痰热腑实证症状的作用，通过检测脑出血面积、神经功能损伤、脑含水量考察NHQXW对痰热腑实型脑出血的改善作用；进一步采用伊文思蓝染色，苏木素-伊红（HE）染色、免疫荧光（Immunofluorescence）和蛋白印迹法（Western blot）检测闭合蛋白-5（Claudin-5）、质膜膜泡关联蛋白（PLVAP）和基质金属蛋白酶2/9（MMP-2/9）的表达，考察NHQXW对痰热腑实型脑出血诱导的BBB功能紊乱的改善作用；最后通过检测丝氨酸/苏氨酸激酶（Akt）、细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）、信号转导及转录激活蛋白3（STAT3）和Yes相关蛋白（YAP）及其磷酸化蛋白表达的差异，考察NHQXW改善痰热腑实型脑出血的潜在机制。结果：与Collagenase + Feces组比较，NHQXW-M和NHQXW-H干预后能够降低粪便含水量（P<0.05，P<0.01）和小肠碳墨推进率（P<0.01），显著减轻神经功能损伤（P<0.01），减少相对脑出血面积（P<0.01）和伊文思蓝的渗漏（P<0.01），增加Claudin-5蛋白表达量（P<0.05，P<0.01）和荧光强度（P<0.01），降低PLVAP蛋白表达量（P<0.01）和荧光强度（P<0.05，P<0.01）、MMP-2（P<0.05，P<0.01）和MMP-9（P<0.01）蛋白表达量；NHQXW-H组p-Akt（P<0.05）、p-ERK1/2（P<0.05）、p-STAT3（P<0.01）和p-YAP（P<0.05）蛋白表达水平均下调，抑制STAT3磷酸化作用最为显著。结论：NHQXW能够有效缓解痰热腑实型脑出血小鼠的神经功能缺损及BBB损伤，其机制主要与抑制STAT3活化等有关。
文章目录
1. 材料
1.1 动物
1.2 药物与试剂
1.3 仪器
2. 方法
2.1 分组与给药
2.2 动物模型的制备
2.3 粪便含水量
2.4 小肠碳墨推进率
2.5 神经功能缺损评分
2.6 HE染色
2.7 伊文思蓝渗漏率
2.8 脑含水量
2.9 Western blot检测相关蛋白表达
2.10 免疫荧光
2.11 统计学分析
3. 结果
3.1 牛黄清心丸对痰热腑实型脑出血小鼠粪便含水量与小肠碳墨推进率的影响
3.2 牛黄清心丸对痰热腑实型脑出血小鼠脑出血面积与神经功能损伤的影响
3.3 牛黄清心丸对痰热腑实型脑出血小鼠病理损伤的影响
3.4 牛黄清心丸对痰热腑实型脑出血小鼠脑组织伊文思蓝渗漏与脑含水量的影响
3.5 牛黄清心丸对痰热腑实型脑
