摘要：探讨大黄素对人鼻咽癌（NPC）HONE-1和CNE-2细胞的增殖、迁移、上皮间质转化（EMT）及自噬水平的影响。鼻咽癌HONE-1和CNE-2细胞体外培养，分为对照组，大黄素低(7.5 μg·mL－1)、高(10 μg·mL－1)剂量组，处理48 h。CCK-8和EdU检测HONE-1和CNE-2细胞的增殖能力；克隆形成实验检测HONE-1和CNE-2细胞的克隆形成能力；Transwell小室实验检测HONE-1和CNE-2细胞的迁移能力；干细胞成球实验检测HONE-1和CNE-2细胞干性；免疫荧光染色分析HONE-1和CNE-2细胞微管相关蛋白1轻链3β（LC3B）表达水平；Western blot检测鼻咽癌HONE-1和CNE-2细胞EMT相关蛋白及自噬相关蛋白表达水平。结果显示，大黄素处理48 h后，HONE-1和CNE-2细胞的IC50分别为10.0、9.4 μg·mL－1。与对照组相比，大黄素能提高HONE-1和CNE-2细胞的增殖抑制率，且随时间延长或药物浓度的增加，可明显提高细胞的增殖抑制率；能抑制HONE-1和CNE-2细胞的克隆形成能力、迁移能力和干细胞成球能力；提高HONE-1和CNE-2细胞中LC3B表达水平，提高自噬活性。Western blot检测显示，7.5 μg·mL－1大黄素处理48 h后，E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达水平升高，波形蛋白（vimentin）表达水平降低；自噬相关蛋白5（ATG5）和LC3B表达水平升高；螯合体1（p62）表达水平降低。综上，大黄素可促进人鼻咽癌细胞的自噬，抑制鼻咽癌细胞增殖、克隆形成、EMT及肿瘤干细胞成球能力。
文章目录
1 材料
1.1 细胞株
1.2 药品与试剂
1.3 仪器
2 方法
2.1 细胞培养
2.2 CCK-8检测细胞活力
2.3 EdU染色检测细胞增殖能力
2.4 克隆形成实验检测细胞克隆形成能力
2.5 Transwell小室实验检测细胞迁移能力
2.6 干细胞成球实验检测细胞干性
2.7 免疫荧光检测细胞中LC3B的表达
2.8 Western blot检测细胞中E-cadherin、vimentin、ATG5、LC3B、p62的表达
2.9 统计分析
3 结果
3.1 大黄素对HONE-1和CNE-2细胞增殖能力的影响
3.2 大黄素对HONE-1和CNE-2细胞迁移能力的影响
3.3 大黄素对HONE-1和CNE-2细胞成球能力的影响
3.4 大黄素对HONE-1和CNE-2细胞LC3B表达水平的影响
3.5 大黄素对HONE-1和CNE-2细胞EMT相关蛋白及自噬相关蛋白表达水平的影响
3.6 加入3-MA后检测HON
