摘要：目的：应用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法（UPLC-Q-TOF-MS）进行肺组织和粪便代谢组学分析，探讨五味参芩汤改善肺纤维化的作用机制。方法：通过气管内注射5mg·kg-1博来霉素构建肺纤维化大鼠模型，将造模成功的大鼠随机分为空白组、模型组、泼尼松(3.15mg·kg-1)组和五味参芩汤低、中、高剂量(4.586、9.172、18.344g·kg-1)组，每天灌胃给药1次，连续给药28d。苏木素-伊红（HE）染色测大鼠肺和结肠组织病理变化，马松（Masson）染色检测肺组织纤维化程度；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测支气管肺泡灌洗液和肠粘液中白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、分泌型免疫球蛋白A（SIgA）表达；免疫组化和逆转录实时定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测肺组织I型胶原蛋白（Col-I）、纤连蛋白（FN）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达。UPLC-Q-TOF-MS研究五味参芩汤对肺纤维化大鼠肺和粪便中代谢网络的变化特征，筛选五味参芩汤治疗肺纤维化的潜在生物标志物并进行通路富集分析。结果：与空白组比较，模型组大鼠肺组织出现大量炎性细胞浸润及连续纤维化病灶，结肠黏膜损伤，结缔组织增生；支气管肺泡灌洗液和肠粘液中IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、SIgA表达显著升高（P<0.01）；肺组织Col-I、FN、α-SMA蛋白及mRNA表达均显著上调（P<0.01）。与模型组比较，五味参芩汤组能够显著减少大鼠肺组织中炎性浸润及蓝色胶原沉积，减轻结肠损伤，降低支气管肺泡灌洗液和肠粘液中IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、SIgA表达（P<0.01），降低肺组织Col-I、FN、α-SMA平均吸光度值和mRNA的表达（P<0.05，P<0.01），其中以泼尼松组和五味参芩汤中、高剂量组效果最为明显。肺组织代谢组学结果显示，与空白组比较，模型组有19个化合物差异显著（P<0.05，P<0.01），与模型组比较，五味参芩汤能对其中17种化合物产生回调作用（P<0.05，P<0.01）。粪便代谢组学结果显示，与空白组比较，模型组有42个化合物差异显著（P<0.05，P<0.01），与模型组比较，五味参芩汤能回调其中41种化合物（P<0.05，P<0.01）。联合分析结果显示，五味参芩汤可能通过调控苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成以及视黄醇代谢通路发挥抑制肺纤维化的作用。结论：五味参芩汤能够改善肺纤维化，可能与调控“肺-肠轴”有关。
文章目录
1 材料
1.1 动物
1.2 药品与试剂
1.3 仪器
2方法
2.1 药物制备
2.2 肺纤维化模型的建立、分组与给药
2.3 肺脏器系数的测定
2.4 组织病理学观察
2.5 大鼠BALF和肠粘液中SIgA、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8水平检测
2.6 Real-time PCR
2.7 免疫组化法检测大鼠肺组织中Col-1、FN、α-SMA的表达量
2.8 五味参芩汤对肺纤维化大鼠肺组织和粪便代谢特征的研究
2.8.1 样本制备
2.8.2 UPLC-Q-TOF/MS分析条件
2.8.2.1 色谱条件
2.8.2.2 质谱条件
2.8.3 UPLC-Q-TOF/MS多元统计分析
2.8.4 代谢途径分析
2.9 统计学分析
3 结果
3.1 五味参芩汤对肺纤维化大鼠肺脏器系数的影响
3.2 五味参芩汤对肺纤维化大鼠肺和结肠组织病理学的影响
3.3 五味参芩汤对支气管肺泡灌洗液和肠粘液炎症因子水平的影响
3.4 五味参芩汤对大鼠肺组织Col-I、FN、α-SMA蛋白表达影响
3.5 五味参芩汤对大鼠肺组织Col-I、FN、α-SMA mRNA表达的影响
3.6 五味参芩汤对肺纤
