摘要：目的：建立一种利用实时荧光聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）技术快速检测3种真鲷鱼与11种罗非鱼源性成分的方法。方法：以真赤鲷、金赤鲷、蓝点赤鲷cytb基因以及尼罗罗非鱼、莫桑比克罗非鱼、奥利亚罗非鱼COI基因为目标基因，分别设计两组引物和Taqman探针的组合物，以期鉴别真鲷鱼和罗非鱼成分。结果：该方法特异性良好，耗时短，反应只需1 h；实时荧光PCR试验中，真鲷鱼和罗非鱼的基因组DNA检出限均为10-2 ng，质量分数检出限为0.1%；质量分数定量试验中，真鲷鱼的质量分数误差≤±5.5%，罗非鱼的质量分数误差≤±4.9%；双重实时荧光PCR试验中，真鲷鱼和罗非鱼的基因组DNA检出限均为10-2 ng，当真鲷鱼和罗非鱼以不同质量分数混合时，真鲷鱼的质量分数检出限为20%，罗非鱼的质量分数检出限为0.1%；当真鲷鱼和罗非鱼以相同质量分数混合时，真鲷鱼的质量分数检出限为10%，罗非鱼的质量分数检出限为0.01%。结论：该方法特异性强、所需时间短、检出限低、操作简单，可满足真鲷鱼与罗非鱼真伪的鉴别要求。
文章目录
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.2 主要仪器与设备
1.3 实验方法
1.3.1 样品DNA的提取
1.3.2 引物设计
1.3.2.1 真鲷鱼引物设计
1.3.2.2 罗非鱼引物设计
1.3.3 实时荧光PCR体系的构建
1.3.3.1 实时荧光PCR反应参数
1.3.3.2 样品基因组DNA有效性验证试验
1.3.3.3 实时荧光PCR特异性试验
1.3.3.4 实时荧光PCR基因组检出限试验
1.3.3.5 实时荧光PCR罗非鱼中真鲷鱼质量分数检出限与定量试验
1.3.3.6 实时荧光PCR真鲷鱼中罗非鱼质量分数检出限与定量试验
1.3.4 双重实时荧光PCR体系的构建
1.3.4.1 双重实时荧光PCR反应参数
1.3.4.2 双重实时荧光PCR特异性试验
1.3.4.3 双重实时荧光PCR基因组检出限试验
1.3.4.4 双重实时荧光PCR真鲷鱼与罗非鱼质量分数检出限试验
1.3.5 市售真鲷鱼与罗非鱼源性成分检测
1.3.6 质量控制标准
2 结果与分析
2.1 实时荧光PCR体系
