豌豆低聚肽缓解非酒精性脂肪肝作用及其机制

　　摘要：为研制来源天然、毒副作用小的非酒精性脂肪肝病（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）干预或缓解因子，该研究通过酶解方法制备豌豆低聚肽，检测其3-羟基-3-甲基戊二酰单酰辅酶A（3-hydroxy-3-methylglutaryl monocoenzyme A，HMG-CoA）还原酶抑制活性和体外NAFLD缓解作用及缓解机制研究。结果表明，100 mg/mL低聚肽抑制率达56.62%；HepG2细胞构建的NAFLD模型检测中，800 μg/mL的豌豆低聚肽能够显著减少细胞的内脂质沉积，且细胞内甘油三酯和总胆固醇含量也被显著降低。Western blot检测表明，豌豆低聚肽通过激活AMPK磷酸化来抑制ACC活性和SREBP-2的表达，进一步上调CPT1的表达和下调HMGCR的表达，从而加强了脂肪酸的β-氧化，减弱了胆固醇的合成途径，最终降低了细胞内的脂质积累。

　　文章目录

　　1 材料与方法

　　1.1 材料与试剂

　　1.2 仪器与设备

　　1.3 实验方法

　　1.3.1 豌豆低聚肽的制备

　　1.3.2 豌豆低聚肽基础理化性质分析

　　1.3.2.1 基础理化成分测定

　　1.3.2.2 氨基酸组成测定

　　1.3.2.3 分子质量分布测定

　　1.3.3 HMG-CoA还原酶抑制实验

　　1.3.4 NAFLD细胞模型评价

　　1.3.4.1 细胞培养

　　1.3.4.2 CCK8法检测样品的细胞毒性

　　1.3.4.3 油红O染色

　　1.3.4.4 细胞甘油三酯（triglyceride，TG）、总胆固醇（total cholesterol，TC）检测

　　1.3.4.5 Western blot检测

　　1.3.5 数据处理

　　2 结果与分析

　　2.1 豌豆低聚肽的基础理化性质

　　2.2 豌豆低聚肽的HMG-CoA还原