摘要：目的：探究活血荣络方（Huoxue Rongluo Fang，HXRLF）对缺血性中风（ischemic stroke， IS）后血脑屏障修复的作用机制。方法：将雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术（Sham）组，脑梗死模型（MCAO）组，昼夜节律紊乱合并脑梗死模型（ECD-MCAO）组，活血荣络方低、中、高剂量组（HXRLF-L、M、H）组(8.5、17、34 g·kg-1·d-1)、阳性药物丁苯酞（NBP）组(0.23 mL·d-1)，Sham组仅分离暴露血管，但不插入线栓，其余各组制备小鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）模型，ECD-MCAO组、HXRLF各剂量组、NBP组制备环境生物节律紊乱（ECD）模型，Sham组、MCAO组、ECD-MCAO组小鼠予以等体积大豆油灌胃，其他各组给予对应药物灌胃，各组连续给药7天后取材。采用mNSS评分评估HXRLF对IS后神经系统缺损的修复作用；通过苏木精-伊红染色评估HXRLF对IS后脑组织病理学损伤的影响；采用TTC染色、脑血流灌注状态评估HXRLF对IS后脑组织损害的修复作用；伊文思蓝染色、透射电镜评估HXRLF对IS后血脑屏障通透性损伤的改善作用；免疫荧光染色观察脑组织内血管性血友病因子vWF（von Willebrand Factor）、Bmal1（brain and muscle Arnt-like 1）及闭锁蛋白（Occludin）表达；Western blot检测Bmal1、Occludin、紧密连接蛋白（Claudin-5）及血管内皮生长因子VEGF（vascular endothelial growth factor）、血管生成素Ang（angiopoietins）的蛋白表达并相关分析。结果：与Sham组比较，MCAO组神经功能缺损、脑梗死体积、脑病理损伤、BBB渗漏显著加重（P<0.01），脑血流灌注减少（P<0.01），脑组织内Bmal1、vWF、VEGFA、Ang表达增强（P<0.01），Occludin、claudin-5表达减弱（P<0.01）；与MCAO组比较，ECD-MCAO组神经功能缺损、脑梗死体积、BBB渗漏均加重（P<0.01），脑病理损伤加重（P<0.05），脑血流灌注进一步减少（P<0.01），脑组织内Bmal1、vWF、VEGFA、Ang、Occludin、claudin-5表达均显著下降（P<0.01）；与ECD-MCAO组比较，HXRLF各剂量组对神经功能缺损、脑梗死体积、脑病理损伤、BBB渗漏均显著改善（P<0.01），增加脑血流灌注（P<0.01），增强脑组织内Bmal1、vWF、VEGFA、Ang、Occludin、claudin-5表达水平（P<0.01）。结论：HXRLF可调控生物钟蛋白Bmal1，促进VEGFA、Ang、Occludin、claudin-5表达，从而改善缺血性中风后血脑屏障损伤。
文章目录
1 材料
1.1 动物
1.2 药物与试剂
1.2.1 药品
1.2.2 试剂
1.3 仪器与耗材
2 方法
2.1 模型制备
2.1.1 环境生物节律紊乱（environmental circadian disruption，ECD）模型制备方法
2.1.2 小鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）模型制备方法
2.2 分组及给药
2.3 神经功能缺损（mNSS）评分
2.4 TTC染色检测脑梗死体积
2.5 EB染色检测血脑屏障通透性损伤
2.6 激光多普勒血流仪监测脑梗死后脑血流灌注（CBF）状态
2.7 HE检测脑梗死后海马病理学改变
2.8 透射电子显微镜（TEM）观察血脑屏障形态变化
2.9 免疫荧光检测小鼠脑组织中Bmal1、血管性血友病因子（von Willebrand Factor， vWF）与闭锁蛋白（Occludin）的表达
2.10 Western blot检测Bmal1、Occludin、紧密连接蛋白（Claudin-5）及VEGFA、ANG的蛋白表达
2.11 统计学分析
3 结果
3.1 活血荣络方对小鼠神经功能及脑
