摘要：目的 探讨乌梅丸及其拆方对大鼠小肠隐窝上皮细胞（intestinal epithelioid cell line No. 6，IEC-6）上皮—间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）模型及炎症、氧化应激水平的影响。方法 制备乌梅丸及其拆方含药血清。转化生长因子-β1(transforming growth factor β1，TGF-β1)诱导IEC-6细胞建立EMT模型，采用CCK-8法检测细胞活力，酶联免疫吸附实验检测EMT相关蛋白鉴定细胞模型。将IEC-6细胞分为七组：空白组、模型组、乌梅丸全方组、酸味药组、辛味药组、苦味药组、甘味药组(各组给予5%相应空白血清或含药血清+15 ng/mL TGF-β1)。划痕实验观察各组细胞12小时迁移率；ELISA法检测细胞培养上清液中白细胞介素-13（interleukin-13，IL-13）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白细胞介素-10（interleukin-10，IL-10）水平；2，7-二氯荧光素二乙酸酯荧光探针法检测细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）含量；比色法检测细胞内还原型谷胱甘肽（reduced glutathione，GSH）含量；免疫荧光法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin??，α-SMA）、紧密连接蛋白-1（zonula occludens protein-1，ZO-1）的表达。结果 与空白组相比，模型组细胞迁移速率加快（P＜0.01）、IL-13、TNF-α、ROS、α-SMA表达水平显著升高（P＜0.01）；IL-10、GSH、ZO-1表达水平显著降低（P＜0.01）。与模型组相比，乌梅丸全方组、酸味药组与甘味药组12小时 迁移率降低（P＜0.01）；乌梅丸全方组及各拆方组GSH、ZO-1表达水平均增加（P＜0.01），IL-13表达水平均降低（P＜0.01）；除辛味药组外，各组TNF-α表达水平均显著降低（P＜0.05，P＜0.01），IL-10表达水平均显著升高（P＜0.01）；除苦味药组外，各组ROS、α-SMA表达水平均降低（P＜0.01）。结论 乌梅丸及其各拆方组对于IEC-6细胞EMT进程均有一定的改善作用。乌梅丸全方、酸味药组与甘味药组能够降低细胞迁移率及相关细胞因子，降低炎症、改善氧化应激水平；辛味药组及苦味药组对炎症及氧化应激有一定改善作用。
文章目录
1 材料与方法
1.1 细胞与动物
1.2 药物及试剂
1.3 主要仪器
1.4 方法
1.4.1 含药血清的制备
1.4.2 细胞培养
1.4.3 细胞模型制备
1.4.4 细胞模型鉴定
1.4.5 CCK-8法检测乌梅丸全方组含药血清对IEC-6 EMT模型细胞活力的影响
1.4.6 划痕实验检测IEC-6 EMT模型细胞迁移能力
1.4.7 ELISA法检测IEC-6 EMT模型细胞上清液IL-13、TNF-α、IL-10的表达水平
1.4.8 2，7-二氯荧光素二乙酸酯荧光探针法检测IEC-6 EMT模型细胞内ROS含量
1.4.9 比色法检测IEC-6 EMT模型细胞内GSH含量
1.4.10 免疫荧光法检测IEC-6 EMT模型细胞相关蛋白α-SMA及ZO-1的表达
1.5 统计学方法
2 结果
2.1 不同浓度TGF-β1对IEC-6细胞活性及形态的影响
2.2 TGF-β1对IEC-6 细胞E-cadherin与N-cadherin的表达量的影响
2.3 乌梅全方含药血清对IEC-6 EMT模型细胞活性的影响
2.4 各组IEC-6 EMT模型细胞迁移能力
