摘要：目的：本文旨在分析B7-H3在结直肠癌 (colorectal cancer， CRC)组织中的表达及与肿瘤微环境 (tumor microenvironment， TME)中浸润的免疫细胞之间的相关性，继而探讨B7-H3异常表达的临床意义以及对免疫微环境重塑的影响。方法：本文利用TCGA数据库分析B7-H3在CRC中的表达及临床意义，采用单因素和多因素Cox回归分析对B7-H3进行独立预后分析；运用生物信息学分析B7-H3表达水平与间质细胞及免疫细胞浸润之间的关系。在此基础上以Transwell实验观察了肿瘤细胞表达的B7-H3对巨噬细胞迁移能力的影响，同时采用多重免疫组化技术 (multiplex immunohistochemistry， mIHC)研究CRC中B7-H3与巨噬细胞、中性粒细胞以及肿瘤相关成纤维细胞 (cancer-associated fibroblasts， CAFs)之间的表达定位关系。结果：(1) B7-H3在CRC组织中异常表达 (P＜0.0001)，CRC共识分子4型 (consensus molecular subtype 4， CMS4)样本B7-H3的表达显著高于CMS2型和CMS3型 (P＜0.001)；(2) B7-H3高表达的CRC患者总体生存期 (overall survival， OS)和疾病特异性生存期 (disease specific survival， DSS)显著低于B7-H3低表达组 (P＜0.05)，B7-H3可作为CRC患者的独立预后因素；(3) B7-H3高表达的CRC组织中免疫细胞和间质细胞的浸润水平显著高于B7-H3低表达样本 (P＜0.001)，B7-H3的表达水平与巨噬细胞与中性粒细胞浸润水平呈显著正相关 (P＜0.001)，单细胞数据显示B7-H3在CAFs中表达丰度最高；(4) B7-H3与巨噬细胞标志物CD68、中性粒细胞标志物MPO以及CAFs标志物α-SMA存在共定位，肿瘤细胞中B7-H3的沉默显著抑制了巨噬细胞与CAFs的迁移能力 (P＜0.001)。结论：CRC组织中B7-H3异常高表达并与肿瘤微环境中巨噬细胞、中性粒细胞以及CAFs浸润相关。鉴此，B7-H3与CRC患者的多项临床病理特征及免疫微环境重塑密切相关，可作为CRC潜在的肿瘤治疗微环境评估和预后的标志物。
文章目录
1 资料与方法
1.1 数据收集
1.1.1 RNA-seq数据收集：
1.1.2 免疫组织化学染色数据收集：
1.1.3 临床数据收集：
1.1.4 共识分子分型 (consensus molecular subtype， CMS)数据收集：
1.2 数据处理及筛选
1.2.1 生存分析与可视化：
1.2.2 差异基因鉴定：
1.2.3 免疫浸润分析：
1.2.4 单细胞水平CRC中B7-H3的表达分析：
1.3 多重免疫荧光
1.4 B7-H3稳定敲除的结直肠癌细胞株的构建
1.5 Transwell小室共培养及迁移测定
1.5.1人单核细胞系THP-1(购自ATCC细胞库)在37℃和5% CO2环境下培养。
1.5.2 使用Transwell小室进行细胞迁移的测定。
1.6 统计学分析
2 结果
2.1 B7-H3在CRC中呈异常高表达且与患者不良预后密切相关
2.2 结直肠肿瘤微环境B7-H3的表达与免疫细胞浸润以及肿瘤相关成纤维细胞表达呈显著正相关
2.3 B7-H3参与CRC中巨噬细胞、中性粒细胞及CAFs在肿瘤组织浸润的调控
3 讨论
