摘要：该本研究旨在构建高效的厚垣普可尼亚菌（Pochonia chlamydosporia）原生质体遗传转化体系，以促进基因转化和遗传改造及后续的生物学功能研究。通过正交试验，本研究系统优化了电转化过程中电压、稳渗剂、电脉冲时间、核酸质量浓度和原生质体浓度等关键因素。结果显示，最佳的电转化条件为：电压250 V、稳渗剂为0.6 mol/L蔗糖溶液、电脉冲时间10 ms、质粒浓度1%、原生质体浓度1 × 10?个/mL，转化效率达到0.4 × 103 CFU/μg。结果显示，最佳的电转化条件为：电压250 V、稳渗剂为0.6 mol/L蔗糖溶液、电脉冲时间10 ms、质粒浓度1 μg/mL、原生质体浓度1 × 10?个/mL，转化效率达到0.4 × 103 CFU/μg。正交互作分析结果表明，这五个因素对电转化效率的影响顺序为：质粒浓度 > 原生质体浓度 > 电脉冲时间 > 稳渗剂种类 > 电压。在获得阳性转化子的基础上，本研究进一步评估了其菌落形态、生长速率、分生孢子产量、菌丝干重及对3种动物胃肠道蠕虫卵的侵染能力。结果显示，电转化过程未显著影响厚垣普可尼亚菌的生物学功能；转化株在荧光显微镜下成功表达增强型绿色荧光蛋白（EGFP），且PCR分析证实了潮霉素抗性基因的有效转入。综上所述，本研究成功构建了P. chlamydosporia原生质体通过电击介导的遗传转化体系，为深入探讨其对寄生性虫卵的侵染机制提供了重要依据。
文章目录
1.材料与方法
1.1 主要试剂与菌株
1.2 主要溶液配置
1.3 虫卵悬液制备
1.4 P. chlamydosporia潮霉素最低抑制浓度试验
1.5 P. chlamydosporia原生质体电转化的条件的确立及正交试验设计
1.6 P. chlamydosporia原生质体制备
1.7 P. chlamydosporia原生质体电转化
1.8 转化菌株的鉴定
1.8.1EGFP荧光信号观察原生质体转化情况
1.8.2P. chlamydosporia阳性转化子的筛选与鉴定
1.9 转化菌株生物学特性观察
1.9.1 野生型和转化菌株生长速率测定
1.9.2 野生型和转化菌株分生孢子浓度测定
1.9.3 野生型和转化菌株菌丝干重测定
1.10 P. chlamydosporia转化菌对寄生性蠕虫卵侵染效果试验
1.11 数据分析
2.结果
2.1 P. chlamydosporia原生质体
