摘要：目的 采用Cre-loxP技术构建并鉴定自然杀伤（NK）细胞条件性Cd226基因敲除小鼠，进一步探索NK细胞表面CD226分子在缓解溃疡性结肠炎（UC）小鼠肠道炎症中的作用。方法 通过loxP标记的转基因小鼠以及天然细胞毒性受体1（Ncr1）-Cre工具鼠，依靠Cre-loxP系统构建NK细胞条件性Cd226基因敲除小鼠模型；采用PCR技术和琼脂糖凝胶电泳技术对小鼠基因型进行鉴定，用葡聚糖硫酸钠诱导构建Cd226基因敲除小鼠UC小鼠模型，流式细胞术检测NK细胞上CD226的表达水平以及相关免疫细胞在结肠组织的浸润水平；HE染色验证结肠组织炎症水平。结果 DNA凝胶电泳技术和流式细胞术证实NK细胞条件性Cd226基因敲除小鼠成功构建；NK细胞条件性敲除Cd226基因后，UC小鼠模型炎症状况缓解，流式细胞术结果显示外周血和结肠固有层中NK细胞比例降低，HE染色结果显示肠道炎症反应减轻。结论 NK细胞特异性敲除Cd226通过减少NK细胞数量及抑制其促炎功能缓解小鼠UC模型肠道炎症。
文章目录
1 材料与方法
1.1材料
1.2方法
1.2.1 基因敲除小鼠的构建策略
1.2.2小鼠基因型鉴定
1.2.3 构建UC小鼠模型
1.2.4 制备小鼠外周血单细胞悬液
1.2.5 结肠固有层组织单细胞悬液提取
1.2.6 流式细胞术鉴定
1.2.7 HE染色
1.2.8 统计学分析
2结果
2.1 PCR检测证实NK细胞CD226 CKO小鼠成功构建
2.2 流式细胞术验证NK细胞CKO小鼠CD226分子成功敲除
2.3 NK细胞条件性敲除Cd226基因对UC小鼠模型的影响
3讨论
