摘要：采用网络药理学、分子对接分析以及细胞试验探讨续断-熟地黄复合提取物调节HepG2细胞糖代谢的作用机制，为后续中药治疗犬猫Ⅱ型糖尿病提供参考依据。首先通过TCMSP、Gene-Cards、OMIM等数据库获取续断和熟地黄的活性成分及成分-疾病作用靶点；然后通过PPI网络分析和GO与KEGG富集分析以及分子对接验证核心成分与核心靶点的结合能力；最后通过MTT法筛选出合适的中药浓度，采用高糖联合胰岛素作用细胞建立胰岛素抵抗-HepG2（IR-HepG2）细胞模型，通过RT-qPCR检测核心靶点及糖代谢相关酶的mRNA表达水平，验证续断-熟地黄对IR-HepG2细胞糖代谢的作用效果。结果显示，筛选获得续断-熟地黄活性成分26个，其中核心成分为林生续断苷Ⅲ-qt、臭山羊碱、葳岩仙皂苷A-qt等；交集靶点402个，其中STAT3、EGFR、HSP90AA1、AKT1、IL6为治疗二型糖尿病（T2DM）的核心靶点。细胞试验结果显示，中药复合提取物最佳作用浓度为10-6 g/mL，可显著促进细胞增殖（P<0.05）。RT-qPCR结果表明，中药复合提取物可显著上调AKT1、INSR、GLUT4、AMPK、GCK以及GYS2的表达水平（P<0.05），并显著下调STAT3、EGFR、HSP90AA1、IL-6、GSK-3β、PEPCK以及G6Pase的表达水平（P<0.05）。续断-熟地黄可通过多成分、多靶点、多通路改善胰岛素抵抗，有效改善胰岛素抵抗所造成的细胞损伤，降低炎症反应，提高胰岛素信号转导通路关键蛋白的表达水平，改善胰岛素抵抗所带来的糖代谢紊乱。试验结果可为后续续断-熟地黄临床治疗犬猫糖尿病提供理论参考。
文章目录
1 材料与方法
1.1 药物及试剂
1.2 主要仪器
1.3 中药提取
1.4 续断-熟地黄有效成分筛选及其靶点的预测
1.5 疾病靶点的筛选及收集
1.6 续断-熟地黄有效成分与T2DM共同靶点筛选及蛋白质-蛋白质相互作用网络的构建
1.7 GO功能富集分析与KEGG通路分析
1.8 分子对接推测
1.9 MTT法检测中药复合提取物对HepG2细胞增殖的影响
1.10 IR-HepG2细胞模型的建立和分组试验
1.11 RT-qPCR检测IR-HepG2细胞相关因子mRNA的表达水平
1.12 统计学分析
2 结果
2.1 续断-熟地黄有效成分及靶点
2.2 续断-熟地黄对T2DM作用靶点筛选
2.3 交集靶点及核心靶点蛋白质-蛋白质互作网络图
2.4 中药-成分-疾病靶点网络图
2.5 GO功能富集分析及KEGG通路分析结果
2.6 分子对接推测
2.7 续断与熟地黄复合提取物对He
