摘要：目的：探究敲低MMRN2对黑色素瘤B16F10-BM生长和脑转移能力的影响。方法：在超声引导下通过左心室内注射法在C57BL6/J黑鼠中建立B16F10-luc黑色素瘤脑转移动物模型，通过组织块贴壁法将黑色素瘤组织原代培养获得B16F10-F1细胞（F1代细胞）。经过3个“心内注射-分离脑转移瘤-原代培养获取脑转移黑色素瘤细胞”循环后，获得了高脑转移黑色素瘤细胞系B16F10-BM。通过转录组学测序、生物信息学分析结合了临床数据库，筛选出脑转移的关键分子MMRN2；通过使用多个在线数据预测关键分子MMRN2的转录因子，Western blot检测P65、p-p65相关蛋白的表达；采用shRNA感染的细胞实验研究MMRN2对B16F10-BM细胞表型的影响；将对照组B16F10、B16F10-BM和MMRN2shRNA感染的B16F10-BM注射到C57BL6/J黑鼠左心室内，每组6只。建立黑色瘤脑转移模型，10 d后通过小动物活体成像监测小鼠脑部荧光信号强度并处死黑鼠，取脑组织进行H&E染色形态学观察，通过IHC检测黑色素瘤脑组织中CD31、CD34、VEGFA的表达。结果：在黑色素转移瘤中，MMRN2表达显著上调（P<0.001）；P65是MMRN2的上游转录因子（P<0.05）；敲低MMRN2后抑制B16F10-BM细胞的脑转移（P<0.05）并阻碍肿瘤血管的生成（P<0.05）。结论：抑制MMRN2的表达能够减缓C57BL6/J小鼠黑色素瘤的生长并降低其脑转移能力。
文章目录
1. 材料与方法
1.1主要材料与试剂
1.2 动物
1.3方法
1.3.1心内注射法建立MBM瘤模型
1.3.2转录组学分析
1.3.3黑色素瘤预后分子的筛选
1.3.4 GO和KEGG富集分析
1.3.5基因相关性分析和构建蛋白交互网络
1.3.6 Cox-Lasso分析
1.3.7转录调控预测
1.3.8细胞实验
1.3.9蛋白印迹分析
1.3.10动物实验
1.3.11 H&E染色
1.3.12免疫组化
1.4统计学处理
2.结果
2.1心内注射法建立脑转移模型获得高脑转移性黑色素瘤细胞
2.2转录组学结果和风险分子筛选
2.3 MMRN2是脑转移和不良预
