摘要：本试验旨在研究花椒毒酚阿拉伯糖苷（Xan）对过氧化氢（H2O2）诱导的猪肠上皮细胞（IPEC-J2细胞）氧化应激损伤的影响。采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测IPEC-J2细胞活力,将IPEC-J2细胞分为对照组（Control组）、Xan组、Xan+H2O2组和H2O2组,每组3个重复。采用流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测IPEC-J2细胞内活性氧（ROS）含量,试剂盒检测抗氧化酶活性及炎性因子含量,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）测定核因子E2相关因子2（Nrf2）信号通路基因mRNA相对表达量,蛋白质免疫印迹（Western bolt）检测Nrf2信号通路蛋白和凋亡蛋白相对表达量。结果表明:1)与0μmol/L Xan组相比,10μmol/L Xan组的IPEC-J2细胞活力无显著差异（P>0.05）;IPEC-J2细胞内ROS含量显著降低（P<0.05）,Nrf2和血红素加氧酶-1（HO-1）蛋白相对表达量显著升高（P<0.05）。因此,后续选用10μmol/L Xan处理IPEC-J2细胞。2)与Control组相比,Xan组的IPEC-J2细胞内ROS含量显著降低（P<0.05）,总抗氧化能力（T-AOC）显著升高（P<0.05）,Nrf2、HO-1、醌氧化还原酶1（NQO1）、过氧化氢酶（CAT）和超氧化物歧化酶（SOD）mRNA的相对表达量显著升高（P<0.05）,HO-1蛋白相对表达量显著升高（P<0.05）。3)与Control组相比,H2O2组的IPEC-J2细胞中ROS含量显著升高（P<0.05）,CAT和T-SOD活性及T-AOC显著降低（P<0.05）,白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量显著升高（P<0.05）,Nrf2、HO-1、NQO1、CAT和SOD mRNA相对表达量显著降低（P<0.05）,Nrf2、HO-1、NQO1和B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）蛋白相对表达量显著降低（P<0.05）,诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、Kelch样ECH关联蛋白1（Keap1）和B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白（Bax）蛋白相对表达量显著升高（P<0.05）。4)与H2O2组相比,Xan+H2O2组的IPEC-J2细胞中ROS含量显著降低（P<0.05）,CAT和T-SOD活性及T-AOC显著升高（P<0.05）,IL-1β和TNF-α含量显著降低（P<0.05）,Nrf2、HO-1、NQO1、CAT和SOD mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）,Nrf2、HO-1、NQO1和Bcl-2蛋白相对表达量显著升高（P<0.05）,iNOS、Keap1和Bax蛋白相对表达量显著降低（P<0.05）。综上所述,Xan可以通过激活IPEC-J2细胞内Nrf2信号通路,增加抗氧化酶的表达,降低ROS和炎性因子含量,从而发挥其抗氧化作用,并可以通过调节Bcl-2/Bax信号通路发挥抗细胞凋亡的作用。
文章目录
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 IPEC-J2细胞培养
1.3 CCK-8测定
1.4 ROS含量测定
1.5 抗氧化酶活性测定
1.6 细胞凋亡检测
1.7 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)
1.8 蛋白质免疫印迹(Western blot)检测
1.9 数据统计与分析
2 结果与分析
2.1 Xan对H2O2刺激后IPEC-J2细胞活力的影响
2.2 Xan对IPEC-J2细胞内ROS含量的影响
2.3 Xan对IPEC-J2细胞内Nrf2信号通路相关蛋白相对表达量的影响
2.4 Xan对H2O2诱导的IPEC-J2细胞内ROS含量的影响
2.5 Xan对H2O2诱导的IPEC-J2细胞内抗氧化指标和炎性因子含量的影响
2.6 Xan对H2O2诱导的IPEC-J2细胞内基因表达的影响
2.7 Xan对H2O2诱导的IPEC-J2细胞内蛋白表达的影响
2.8 Xan对H2O2诱导的IPEC-J2细胞凋亡的影响
3 讨 论
4 结 论
