摘要：目的：研究诱导乌头酸酶2（ACO2）发生核转移的条件和作用机制以及ACO2核转移对肝癌细胞PLC5增殖、迁移和侵袭的影响。方法：利用HPA数据库验证ACO2在肝癌细胞中的表达情况；采用免疫荧光染色技术，检测低氧条件对ACO2入核的影响及可能机制；利用NLStradamus网站预测ACO2的潜在核定位信号（NLS）；通过基因截短技术获得核定位序列缺失的ACO2质粒（ACO2△NLS）；运用细胞转染技术构建过表达全长和截短ACO2质粒的PLC5细胞株，将实验分为4组：全长ACO2对照组（ACO2WT+Control）、全长ACO2低氧组(ACO2WT+1%O2)、截短ACO2对照组（ACO2△NLS+Control）、截短ACO2低氧组(ACO2△NLS+1%O2)；通过EdU实验，评估ACO2入核对细胞增殖活性的影响；通过划痕实验和Transwell实验检测ACO2入核对细胞迁移能力和侵袭能力的影响；借助蛋白质免疫印迹分析技术，检测胞核和胞浆中ACO2的表达水平以及迁移侵袭相关蛋白MMP2、MMP9表达水平的变化。结果：HPA数据库显示，ACO2在肝癌细胞核和细胞质中的表达均增加；免疫荧光染色结果显示低氧能够明显促进ACO2进入PLC5细胞核，且ACO2核转移依赖NLS信号；EdU实验显示ACO2WT+1%O2组新增殖细胞明显增高；划痕实验和Transwell实验结果显示ACO2WT+1%O2组细胞迁移和侵袭能力明显增高；Western Blot结果显示ACO2WT+1%O2组ACO2胞核蛋白水平显著增高以及MMP2、MMP9总蛋白水平明显增高。结论：低氧能够诱导ACO2发生核转移，从而增强PLC5细胞增殖、迁移和侵袭的能力。
文章目录
1 材料与方法
1.1 肝癌组织中ACO2表达数据的来源与分析
1.2 细胞及主要试剂
1.3 仪器
1.4 PLC5的培养和传代
1.5 质粒构建
1.6 细胞转染及分组
1.7 免疫荧光染色检测ACO2在细胞内的分布
1.8 EdU实验检测ACO2入核对PLC5细胞增殖的影响
1.9 划痕实验检测细胞迁移
1.10 Transwell实验检测细胞侵袭
1.11 Western blot检测迁移侵袭相关蛋白的表达
1.12 统计学处理
2 结 果
2.1 ACO2在肝癌细胞核中高表达
2.2 低氧诱导PLC5细胞内ACO2核定位增加
2.3 低氧条件促进ACO2发生的核转移依赖NLS信号
2.4 ACO2核转移促进肝癌细胞PLC5增殖
2.5 ACO2核转移促进肝癌细胞PLC5的迁移
2.6 ACO2核转移促进肝癌细胞PLC5
