摘要：为研发具有良好安全性和免疫原性的猫杯状病毒样颗粒疫苗，本研究构建了表达猫杯状病毒衣壳蛋白VP1蛋白载体pSMA-FCV-VP1，经大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达，获得重组His-SUMO-VP1融合蛋白，然后在SUMO酶切组装液中切除His-SUMO标签组装获得FCV-VLPs。对获得的FCV-VLPs通过SDS-PAGE、Western-blot、纳米粒度仪以及透射电子显微镜等多种方法对其进行鉴定。结果表明，VP1条带符合预期目的条带大小(66 kDa)，组装的VLPs粒径均一(30～40 nm)，与猫杯状病毒粒子大小一致。将FCV-VLPs免疫小鼠后，小鼠血清中猫杯状病毒特异性抗体水平为1∶720，该病毒样颗粒能有效促进小鼠脾淋巴细胞增殖。本研究所制备的FCV-VLPs能诱发较强的免疫反应，为猫杯状病毒病疫苗的研发奠定了良好的基础。
文章目录
1 材料与方法
1.1 载体、细胞及动物
1.2 序列设计与合成
1.3 重组质粒的转化
1.4 可溶性重组蛋白的纯化
1.5 FCV-VLPs的组装及鉴定
1.6 血清抗体的检测
1.7 脾淋巴细胞增殖试验
1.8 数据分析及处理
2 结果
2.1 重组质粒pSMA-FCV-VP1的鉴定
2.2 FCV-VP1融合蛋白纯化
2.3 FCV-VLPs的组装与鉴定
2.4 抗体效价检测
2.5 脾淋巴细胞增殖试验
3 讨论
