摘要：目的 分析斑蝥酸钠维生素B6注射液（SCV）对4种人肝癌细胞（SMMC-7721、Bel-7402、Huh7、HepG2）的作用及其机制。方法 设置未用药对照组（0 μmol/L）和0.5、1、2、4、8、16、32 μmol/L SCV组，处理正常肝细胞系L02，采用CCK-8法检测SCV对L02细胞的毒性作用。培养人肝癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402、Huh7、HepG2，设置未用药对照组（0 μmol/L）和2、4、8 μmol/L SCV组。采用CCK-8实验、平板克隆实验、Transwell实验和细胞划痕实验、流式细胞检测实验分别检测SCV对这4种肝癌细胞系的生长增殖能力、细胞克隆形成能力、细胞侵袭和迁移能力、细胞周期和细胞凋亡的影响。采用Western blotting检测凋亡相关的核因子κB亚基P65（P65）、B细胞淋巴瘤2家族蛋白质（Bcl-2）和胱天蛋白酶-3（Caspase-3）的蛋白表达情况，并初步探索其作用机制。结果 CCK-8法检测结果显示，与未用药对照组（0 μmol/L）比较，0.5、1、2、4、8 μmol/L SCV组对L02细胞无毒性作用，选择2、4、8 μmol/LSCV进行后续实验。与未用药对照组（0 μmol/L）比较，不同浓度（2、4、8 μmol/L）的SCV均可明显抑制4种肝癌细胞的增殖能力（P<0.001）。平板克隆实验进一步证实，与未用药对照组（0 μmol/L）比较，不同浓度（2、4、8 μmol/L）的SCV均可明显降低细胞克隆形成能力（P<0.05或P<0.01或P<0.001）。此外，Transwell和细胞划痕实验结果表明，与未用药对照组（0 μmol/L）比较，不同浓度（2、4、8 μmol/L）的SCV可明显抑制肝癌细胞的侵袭和迁移（P<0.05或P<0.01或P<0.001）。在上述结果中，SCV的抑制作用均呈剂量浓度依赖性。流式细胞分析结果显示，SCV可将细胞阻滞于G2/M期（P<0.05或P<0.01或P<0.001），并可明显促进细胞凋亡（P<0.05或P<0.01或P<0.001）。Western blotting检测结果显示，SCV可明显下调P65（P<0.05或P<0.01）和Bcl-2表达（P<0.05），上调Caspase-3的表达（P<0.05或P<0.01）。结论 SCV可明显抑制多种人肝癌细胞的增殖、克隆形成、侵袭和迁移，并可阻滞细胞周期进程。SCV可能通过抑制P65、Bcl-2水平，从而解除其对凋亡通路的抑制作用，进而激活Caspase-3促进凋亡的发生。
文章目录
1 材料与方法
1.1 实验细胞及主要试剂
1.2 方法
1.2.1 细胞培养
1.2.2 CCK-8法检测细胞增殖情况
1.2.2.1 SCV对L02细胞的毒性实验及浓度的选择
1.2.2.2 细胞增殖实验
1.2.3 细胞克隆形成实验
1.2.4 Transwell细胞侵袭实验
1.2.5 细胞划痕迁移实验
1.2.6 细胞周期实验
1.2.7 细胞凋亡实验
1.2.8 Western blotting检测目标蛋白的表达
1.3 统计学处理
2 结 果
2.1 SCV对正常L02细胞毒性的影响
2.2 SCV对肝癌细胞增殖的影响
2.3 SCV对肝癌细胞克隆形成能力的影响
2.4 SCV对肝癌细胞侵袭能力的影响
2.5 SCV对肝癌细胞迁移能力的影响
2.6 SCV对肝癌细胞周期的影响
2.7 SCV对肝癌细胞凋亡的影响
