芜菁酵母文库的构建和PSY潜在互作蛋白BrrCDPK家族成员鉴定

2025-07-23 40 1.88M 0

  摘要:以黄色芜菁W25和白色芜菁W21的不同组织为材料,构建芜菁c DNA酵母文库,库容1.5×107CFU,插入片段平均长度> 1 000 bp。通过构建的诱饵载体pGBKT7-PSY与构建的cDNA文库杂交,共获得了18个阳性互作蛋白,通过酵母双杂交及双分子荧光互补试验(BiFC)验证,明确了候选蛋白CDPK8与PSY存在互作关系。对CDPK家族进行鉴定,共鉴定出50个含有STKc_CAMK protein kinase和2个EF-hand结构域的CDPK基因(命名为BrrCDPK1~BrrCDPK50),结构分析显示CDPK编码氨基酸数在411~660个之间,平均等电点为8.79,各CDPK蛋白之间保守基序数和结构差异不明显,均含有motif 1、motif 2、motif3和motif 6,染色体定位显示BrrCDPKs在7条染色体上的分布是非随机的;系统发育分析表明芜菁BrrCDPK与拟南芥AtCDPK被聚为不同类,暗示其在进化过程中的基因复制具有一定的种属特异性,基因表达谱分析鉴定出14个在黄色芜菁中高表达的CDPK基因。



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