摘要：目的：探讨基于醒脑开窍针法的电针（EA）干预对帕金森病（PD）模型小鼠认知障碍的改善效果，及其对前额叶皮质神经元驱动蛋白家族成员5A（KIF5A）/线粒体Rho GTP酶1（Miro1）信号通路和线粒体自噬的调控作用。方法：将70只清洁级C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常组（12只）、假手术组（12只）及造模预筛组（46只）。造模预筛组小鼠采用六羟基多巴胺（6-OHDA）内侧前脑束单侧立体定位注射制备PD模型。从造模成功的小鼠中随机选取24只分为模型组与电针组，每组12只。电针组予针刺“水沟”和双侧“三阴交”“内关”，同侧“三阴交”和“内关”分别为一组连接电针仪，予疏密波，频率5 Hz/20 Hz，电流0.5 mA，每次20 min，每日1次，每周6次，持续30 d。采用Y迷宫及Morris水迷宫实验评估小鼠认知功能；HE染色法观察小鼠前额叶皮质形态学；荧光探针法检测小鼠前额叶皮质活性氧（ROS）含量；透射电镜观察小鼠前额叶皮质线粒体形态及自噬小体超微结构；实时荧光定量PCR法检测小鼠前额叶皮质酪氨酸羟化酶（TH）mRNA表达；Western blot法检测小鼠前额叶皮质TH、KIF5A、Miro1、p62、Parkin及PTEN 诱导激酶 1（PINK1）蛋白表达。结果：模型组与电针组小鼠每分钟旋转次数大于假手术组（P＜0.001）。与假手术组比较，模型组小鼠Y迷宫实验新臂探索时间减少（P＜0.001）；Morris水迷宫实验逃避潜伏期延长（P＜0.05），穿越平台次数减少（P＜0.01）；前额叶皮质细胞空泡、核固缩神经元数量增加（P＜0.001），可见线粒体自噬小体；前额叶皮质ROS相对表达量升高（P＜0.001），TH蛋白及mRNA表达降低（P＜0.001），Miro1、PINK1、Parkin蛋白表达升高（P＜0.001，P＜0.01），KIF5A、p62蛋白表达降低（P＜0.001）。与模型组比较，电针组小鼠Y迷宫实验新臂探索时间增加（P＜0.01）；Morris水迷宫实验逃避潜伏期缩短（P＜0.05），穿越平台次数增加（P＜0.05）；前额叶皮质细胞空泡、核固缩神经元数量减少（P＜0.001），自噬小体数量减少，线粒体形态改善；前额叶皮质ROS相对表达量降低（P＜0.01），TH蛋白及mRNA表达升高（P＜0.001，P＜0.01），Miro1、PINK1、Parkin蛋白表达降低（P＜0.001，P＜0.01，P＜0.05），KIF5A、p62蛋白表达升高（P＜0.01，P＜0.05）。结论：醒脑开窍法电针可明显改善PD模型小鼠认知障碍及神经功能损伤，其机制可能与调节KIF5A/Miro1信号通路，进而减少前额叶皮质神经元线粒体自噬相关。
文章目录
1 材料与方法
1.1 实验动物及分组
1.2 主要试剂及仪器
1.3 模型制备
1.4 干预方法
1.5 取材
1.6 观察指标及检测方法
1.6.1 认知功能检测
1.6.2 HE染色法观察小鼠前额叶皮质形态学
1.6.3 荧光探针法检测小鼠前额叶皮质ROS含量
1.6.4 透射电镜观察小鼠前额叶皮质线粒体形态及自噬小体超微结构
1.6.5 实时荧光定量PCR法检测小鼠前额叶皮质TH mRNA表达
1.6.6 Western blot法检测小鼠前额叶皮质TH、KIF5A、Miro1、p62、PINK1、Parkin蛋白表达
1.7 统计学处理
2 结果
2.1 各组小鼠行为学结果比较
2.2 各组小鼠前额叶皮质形态学
2.3 各组小鼠前额叶皮质ROS含量比较
2.4 各组小鼠前额叶皮质线粒体形态及自噬小体超微结构
2.5 各组小鼠前额叶皮质TH蛋白及mRNA表达比较
2.6 各组小鼠前额叶皮质KI
