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摘要:本文利用转录组测序(RNA Sequencing,RNA-seq)技术,系统探究了反式肉桂醛(Trans-Cinnamaldehyde,T-CNM)对鲁氏接合酵母(Zygosaccharomyces rouxii)的抗菌机制。通过对比T-CNM处理组与对照组的转录组数据,共筛选出2531个差异表达基因(Differentially Expressed Genes,DEGs),其中1239个基因上调,1292个基因下调。Gene Ontology(GO)和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)富集分析表明,T-CNM显著改变了氧化应激响应、蛋白酶体降解及核糖体生物合成相关通路。基于富集分析结果,揭示T-CNM对Z. rouxii的潜在抗菌机制如下:T-CNM的疏水结构通过破坏细胞膜完整性,诱导胞内活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)爆发,引发脂质、蛋白质和DNA氧化损伤;同时激活泛素-蛋白酶体系统加速异常蛋白降解,消耗能量并干扰功能性蛋白稳态;此外,通过下调核糖体相关基因抑制蛋白质合成,阻断翻译延伸过程,最终协同发挥抗Z. rouxii活性。最后,采用实时逆转录荧光定量PCR(Reverse Transcription Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,RT-qPCR)对SOD2、GPX1、PSMB5等与富集通路相关基因的转录水平进行检测,验证了转录组数据的可靠性。本研究从转录组水平揭示T-CNM通过“氧化损伤-代谢抑制-蛋白稳态失衡”三重调控网络发挥抗Z. rouxii活性,突破了传统单一靶点研究的局限,为天然防腐剂的高效开发与应用提供了理论依据。
文章目录
0 引言
1 材料与方法
1.1 试验材料与仪器
1.1.1 试验菌种
1.1.2 主要材料与试剂
1.1.3 培养基及试剂制备
1.1.4 主要仪器与设备
1.2 试验方法
1.2.1 菌株复苏及处理
1.2.2 RNA提取与检测
1.2.3 文库构建及测序
1.2.4 转录组原始数据的质控
1.2.5 A/T/G/C含量分布检查
1.2.6 转录组数据与参考基因组序列对比
1.2.7 基因表达水平定量
1.2.8 样品相关性
1.2.9 基因差异表达分析
1.2.10 RT-qPCR验证差异表达基因
1.2.11 数据分析
2 结果与讨论
2.1 RNA样本检测结果
2.2 测序结果统计
2.2.1 样本数