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摘要：目的 探讨加味泽泻汤通过磷脂酰肌醇3激酶（Phosphatidylinositol 3-Kinase，PI3K）/蛋白激酶B（Protein Kinase B，Akt）/核因子κB（Nuclear Factor kappa-B，NF-κB）通路对高脂血症内皮损伤的保护作用及潜在机制探析。方法 将30只SD雄性大鼠（4周龄）随机分为正常组6只，造模组24只，其中造模组24只通过饲喂高脂饮食20周后构建高脂血症模型。将造模成功的24只大鼠随机分为4组，模型组、加味泽泻汤正常剂量组、高剂量组及西药阿托伐他汀钙组。经过4周用药干预后，通过检测大鼠体质量、总胆固醇（Total Cholesterol，TC）、甘油三酯（Triglyceride，TG）、高密度脂蛋白胆固醇（High-Density Lipoprotein Cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（Low-Density Lipoprotein Cholesterol，LDL-C）等血脂四项、内皮缩血管肽-1（Endothelin-1，ET-1）及一氧化氮（Nitric Oxide，NO）等内皮功能相关指标及苏木素-伊红（HE）染色对主动脉组织进行染色后，评价加味泽泻汤治疗高脂血症内皮损伤的治疗效果。随后利用网络药理学分析进一步探究发挥作用的药效机制，通过TCMSP、Swiss Target Prediction、HERB、ETCM和BATMAN数据库预测了中药活性成分及靶点；从GeneCards、OMIM、DisGeNET、TTD数据库中获取了与高脂血症和内皮功能障碍相关的靶点。通过韦恩图及蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络和富集分析寻找机制通路，并采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组大鼠PI3K、AKT1、NF-κB、IL6、TNF mRNA表达及Western blot法检测内皮损伤通路相关蛋白p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、NF-κB 的表达水平。结果 与正常组比较，模型组大鼠TC、TG、LDL-C、ET-1水平升高（P<0.01），HDL-C、NO水平降低（P<0.05，P<0.01）。网络药理学分析结果获得加味泽泻汤的的活性成分包括24-乙酰泽泻醇 A、山柰酚、泽泻醇A、泽泻醇B、泽泻醇C、白术内酯I等29个；PPI网络及拓扑分析后共得到IL-6、AKT1、TNF、IL-1B、STAT3等62个核心靶点，富集通路主要涉及PI3K/Akt信号通路、脂质与动脉粥样硬化、HIF-1信号通路、TNF信号通路等156条信号通路。动物实验验证结果显示，与模型组比较，加味泽泻汤可上调PI3K、AKT1、NF-κB、IL6、TNF 等mRNA表达水平，及p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、 NF-κB蛋白表达（P<0.01）。结论 加味泽泻汤具有良好的降低血脂、抑制炎症因子的表达，保护血管内皮功能的作用，其机制可能是通过激活PI3K/AKT/NFκB信号通路实现的。
文章目录
1 实验材料
1.1实验动物
1.2实验药材、试剂与仪器
2 实验方法
2.1 高脂血症大鼠造模方式
2.2 动物分组及给药
2.3 标本采集
2.4各组大鼠体质量及血脂四项变化情况
2.5主动脉组织HE染色病理变化观察
2.6血清炎症因子IL6、TNF-α及ET-1、NO水平检测
2.7网络药理学分析
2.7.1 JWZXD活性成分、靶点预测及网络构建
2.7.2高脂血症及内皮功能障碍疾病靶点获取
2.7.3 PPI网络构建与拓扑分析
2.7.4生物信息学分析
2.8 RT-qPCR 法测定主动脉组织PI3K、Akt、NF-κB、IL6、TNF mRNA表达
2.9 蛋白免疫印迹法（Western Blot）测定主动脉组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、NF-κB p65蛋白表达
2.10数据统计分析
3 结果
