摘要：基于网络药理学、分子对接技术及细胞实验，探讨淫羊藿苷（icariin，ICA）在延缓皮肤光老化中的作用及潜在机制。利用SwissTargetPrediction和GeneCard等数据库筛选ICA的潜在作用靶点；通过OMIM和DrugBank等数据库获取皮肤光老化相关靶点，并将两者共有的靶点导入STRING数据库进行分析，并运用Cytoscape 3.7.2软件构建蛋白互作网络。进一步使用DAVID数据库进行GO和KEGG富集分析，明确其关键信号通路。利用AutoDock 4.2.6软件对ICA与核心靶点进行对接验证。最后，通过细胞实验对关键靶点进行验证。网络药理学分析得出，ICA与皮肤光老化相关的潜在靶点共123个，其中有10个关键核心靶点，包括B细胞淋巴瘤-2（B-cell lymphoma 2，BCL-2）和半胱天冬酶3（cysteinyl aspartate specific protease-3，Caspase-3）等。GO和KEGG富集分析显示，这些靶点主要涉及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B，PI3K/AKT）等信号通路。分子对接结果显示，ICA与靶点BCL-2、Caspase-3具有较强的结合活性。细胞实验结果表明，ICA可显著抑制HaCaT细胞衰老和凋亡。此外，与中波紫外线（ultraviolet B，UVB）组相比，ICA组，BCL-2相关X蛋白（BCL-2-associated X protein，BAX）、剪切的Caspase-3（Cleaved Caspase-3）蛋白表达水平降低，而磷酸化PI3K（p-PI3K）、磷酸化AKT（p-AKT）、BCL-2的蛋白表达水平显著升高。综上，ICA通过调控PI3K/AKT信号通路抑制细胞凋亡，进而延缓皮肤光老化。
文章目录
1 材料与方法
1.1 细胞株
1.2 药物与试剂
1.3 主要仪器
1.4 网络药理学分析
1.4.1 ICA和光老化相关靶点筛选
1.4.2蛋白互作网络的构建及核心靶点的筛选
1.4.3 靶点的富集分析
1.4.4 活性成分-靶点的分子对接
1.5 体外细胞实验
1.5.1 UVB诱导光老化模型的建立
1.5.2 β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老水平
1.5.3 活性氧检测
1.5.4 MTT法检测活力
1.5.5 实验分组及给药
1.5.6 流式分析角质形成细胞凋亡情况
1.5.7 Hoechst 33342观察细胞凋亡情况
1.5.8 Western blot检测细胞PI3K/AKT信号通路和凋亡相关蛋白的表达
1.5.9 统计学方法
