摘要：2'-岩藻糖基乳糖（2'-fucosyllactose，2'-FL）是人初乳中含量最高的母乳寡糖组分，在维持肠道生态平衡、抵抗病原菌的黏附、调节免疫系统及促进神经系统发育等方面发挥重要作用。该研究选用大肠杆菌MG1655作为出发菌株，首先在基因组中整合来源于幽门螺旋杆菌NCTC11639的α1，2-岩藻糖基转移酶FutC，实现了以甘油为碳源从头合成2'-FL。进一步的，通过敲除分支途径基因lacZ和wcaJ、过表达内源乳糖渗透酶LacY和GDP-L-岩藻糖合成途径酶等组合代谢工程改造，强化了2'-FL生产过程中糖基供体与受体的合成供应，有效提高了2'-FL的生产强度。最终，替换重组菌株基因组中FutC为高活性突变体FutCV93I，2'-FL产量在摇瓶和5 L发酵罐水平上分别提高至6.57和31.13 g/L，为后续2'-FL的规模化工业生产提供了重要的数据支持。
文章目录
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
1.1.1 质粒与菌株
1.1.2 培养基及溶液
1.2 实验方法
1.2.1 引物设计
1.2.2 重组菌株的构建
1.2.3 摇瓶发酵方法
1.2.4 补料分批发酵方法
1.2.5 HPLC检测方法
2 结果与分析
2.1 2'-FL从头合成途径的构建
2.2 分支途径基因的敲除与关键代谢通路的强化
2.3 α1，2-岩藻糖糖基转移酶的突变
2.4 5 L生物反应器扩大培养
3 结论与讨论
