摘要：目的：探讨miR-346对过氧化氢（H2O2）诱导的H9c2心肌细胞损伤的影响及分子机制。方法：不同剂量H2O2（0、25、50、100、200和400μmol/L）诱导H9c2细胞6 h，四甲基偶氮唑盐（MTT）检测细胞活性，实时荧光定量聚合酶链式反应（q RT-PCR）检测miR-346和Krüppel样因子4（KLF4）mRNA表达。将体外培养的H9c2心肌细胞分为对照组、mimic-NC组、miR-346 mimic组、inhibitor-NC组、miR-346 inhibitor组、si-NC组、si-KLF4组。对照组不经任何特殊处理，其他组细胞按分组进行转染。q RT-PCR法验证转染效率，TargetScan网站预测和双荧光素酶报告实验验证miR-346和KLF4的靶向关系，蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测各转染组中KLF4蛋白表达。另H2O2模型组、miR-346 inhibitor组、miR-346 inhibitor+si-KLF4组细胞经H2O2诱导6 h,MTT法检测细胞活性，脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）免疫荧光检测细胞凋亡率，试剂盒检测活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量。Western Blot检测增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、活化聚ADP核糖聚合酶（cleaved PARP）和蛋白激酶B（AKT）/糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）通路蛋白磷酸化情况。结果：H2O2（浓度不低于25μmol/L）对H9c2细胞有明显的细胞毒性，且miR-346表达增加，KLF4表达下调（P<0.05或P<0.01）。各组均成功转染，miR-346靶向负调控KLF4的表达。miR-346 inhibitor组H9c2细胞凋亡率、ROS和MDA产生量均低于H2O2组，而细胞活性和SOD水平高于H2O2组（P<0.05）。Western Blot结果显示，与H2O2组相比，miR-346 inhibitor组细胞PCNA、Cyclin D1、Bcl-2/Bax、磷酸化AKT（p-AKT）和磷酸化GSK-3β（p-GSK-3β）蛋白表达量上调，cleaved PARP蛋白表达下调（P<0.05）。与miR-346 inhibitor组比较，miR-346 inhibitor+si-KLF4组H9c2细胞凋亡率、ROS和MDA产生量均升高，细胞活性和SOD水平降低，PCNA、Cyclin D1、Bcl-2/Bax、p-AKT和p-GSK-3β蛋白表达量下调，cleaved PARP蛋白表达上调（P<0.05）。结论：下调miR-346表达通过靶向KLF4抑制H2O2诱导的H9c2心肌细胞凋亡和氧化应激，作用机制可能与AKT/GSK-3β信号通路有关。
