摘要：为了探索能提高体细胞克隆效率的新方法，本研究比较了糖酵解促进剂PS48和表观遗传修饰剂（DNA甲基化酶抑制剂RG108和组蛋白去乙酰化酶抑制剂Scriptaid）的不同处理浓度和时间对犬-猪异种体细胞核移植（interspecies somatic cell nuclear transfer，iSCNT）胚胎发育效率的影响。结果显示：（1）5 μmol/L PS48处理犬耳成纤维细胞（canine ear fibroblasts，cEFs）和脂肪间充质干细胞（canine adipose tissue-derived mesenchymal stem cells，cAd-MSCs）24 h显著增强了其后续iSCNT胚胎的发育能力。PS48处理cEFs组的iSCNT胚胎的卵裂率、4-细胞期率和8-细胞期率均显著高于对照组（46.90%±1.64% vs 13.30%±1.61%，32.30%±1.55% vs 8.26%±0.88%，10.62%±1.68% vs 5.50%±0.84%，P＜0.05）；PS48处理cAd-MSCs组的iSCNT胚胎的卵裂率和4-细胞期率显著高于对照组（49.51%±3.00% vs 31.25%±2.73%，26.21%±2.08% vs 15.18%±1.58%，P＜0.05）。（2）20 μmol/L RG108处理cEFs和cAd-MSCs 48 h对iSCNT胚胎发育效率无显著影响；400 nmol/L、500 nmol/L和600 nmol/L Scriptaid分别处理cEFs和cAd-MSCs 24 h对iSCNT胚胎发育效率无显著影响。（3）20 μmol/L RG108处理两种供体细胞来源iSCNT胚胎对其发育有显著促进作用（P＜0.05）。500 nmol/L Scriptaid处理cEFs来源的iSCNT胚胎16 h可显著提高其卵裂率和4-细胞期率（23.08%±2.94% vs 9.47%±1.70%，18.68%±3.25% vs 6.32%±1.07%，P＜0.05）。本研究建立了几种能显著提高犬体细胞核移植胚胎发育效率的新方法，有助于促进犬体细胞克隆技术的应用和发展。
文章目录
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 供体cEFs和cAd-MSCs系的建立
1.3 线粒体膜电位（TMRE）检测
1.4 猪卵母细胞的成熟培养
1.5 犬-猪iSCNT胚胎的构建、融合和激活
1.6 犬-猪iSCNT胚胎的体外培养
1.7 犬-猪iSCNT技术的优化
1.8 统计分析
2 结果与分析
2.1 成功分离cEFs和cAd-MSCs
2.2 PS48处理cEFs和cAd-MSCs后线粒体膜电位下调
2.3 PS48处理cEFs和cAd-MSCs对后续犬-猪iSCNT胚胎体外发育的影响
2.4 RG108处理cEFs和cAd-MSCs对后续犬-猪iSCNT胚胎体外发育的影响
2.5 Scriptaid处理cEFs和cAd-MSCs对后续犬-猪iSCNT胚胎体外发育的影响
2.6 RG108处理两种犬-猪iSCNT胚胎对其体外发育的影响
2.7 Scriptaid处理两种犬-猪iSCNT胚胎对其体外发育的影响
3 讨论
3.1 糖酵解促进剂PS48处理供体细胞对犬-猪iSCNT胚胎发育的影响
3.2 表观遗传修饰剂处理
