摘要：大肠杆菌Nissle 1917 (E.coli Nissle 1917，EcN ) 作为一种大肠杆菌类益生菌，常作为递送载体递送到生物体内发挥作用。为了提升EcN载体在宿主体内的递送效率，构建了一种可控延迟裂解型EcN工程菌。以alr及dadX两种EcN菌株细胞壁合成必须基因作为靶标，利用自杀质粒pRE112介导的同源重组技术，成功获得依赖于外源D-丙氨酸的EcN菌株。后续表型分析证实，突变菌株在缺乏D-丙氨酸的条件下表现出明显的生长抑制。本研究为后续EcN作为工程载体菌的研究奠定了重要基础，对活菌载体的应用效能具有重要意义。
文章目录
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1 供试材料
1.1.2 试剂与仪器
1.2方法
1.2.1 引物设计
1.2.2 EcN 1917基因组提取与目的片段获取
1.2.3 alr基因缺失自杀质粒pYL477的构建
1.2.4 dadX基因缺失自杀质粒pYL478的构建
1.2.5 pYL477与大肠杆菌同源重组
1.2.6 pYL478与大肠杆菌同源重组
1.2.7 效果验证
2 结果
2.1 pYL477的鉴定
2.2 pYL478的鉴定
2.3 pYL477与大肠杆菌同源重组的鉴定
2.4 pYL478与大肠杆菌同源重组的鉴定
2.5 营养缺陷型菌株体外培养
2.6 基因缺失株的生长调控
2.6.1 活菌计数
2.6.2 荧光显微镜下观察
2.6.3 扫描电镜下观察
