摘要：马红球菌（Rhodococcus equi，R. equi）为胞内寄生菌，主要可导致马驹发生化脓性支气管肺炎，给马产业造成重大的经济损失。毒力相关脂蛋白A（Virulence-associated protein A， VapA）是R. equi致病的关键毒力因子，尽管研究证明用其免疫动物对R. equi感染具有一定抑制作用，但尚未查询到抗R. equi商品化疫苗。生物信息学分析显示R. equi的ABC转运蛋白可作为抵抗R. equi感染的潜在保护性抗原。本研究用原核表达的方法制备重组ABC转运蛋白（rABC），并将rABC、重组VapA蛋白（rVapA，阳性对照）和PBS（阴性对照）与弗氏佐剂乳化后分别免疫BALB/c小鼠，检测其免疫效果。结果显示，获得了符合预期分子量（62 kDa）且纯化的rABC；rABC和rVapA免疫后14 d开始产生特异性抗体；免疫后42 d血清IgG抗体的P/N值≥15.0，IgG1和IgG2a抗体效价分别为1:409 600和1:102 400，脾脏TNF-α阳性CD4+和CD8+ T细胞比例均较阴性对照组显著升高（P<0.05）；攻菌后7 d，rABC免疫组的脾细胞TNF-α及IL-6分泌量均较阴性对照组显著升高（P<0.05），且减轻了肺脏组织的病理变化。本研究结果提示，ABC转运蛋白能诱导小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫应答，并可减轻肺脏病理损伤，是R. equi亚单位疫苗开发的潜在候选抗原。
文章目录
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验动物
1.1.2 质粒与菌种
1.1.3 主要试剂
1.2 方法
1.2.1 重组蛋白的诱导表达及纯化
1.2.2 重组蛋白与佐剂乳化判定
1.2.3 重组蛋白免疫BALB/c小鼠
1.2.4 用间接ELISA检测小鼠血清重组蛋白特异性抗体水平
1.2.5 流式细胞术检测TNF-α和IFN-γ阳性的CD4+和CD8+ T淋巴细胞数
1.2.6 R. equi 感染免疫后小鼠的生命体征评分
1.2.7 R. equi 感染免疫后小鼠的肺脏组织病理学评分
1.2.8 数据分析
2 结果与分析
2.1 rABC、rVapA蛋白的表达及纯化结果
2.2 重组蛋白免疫小鼠后血清中抗原特异性IgG水平
2.3 免疫后血清中抗原特异性IgG1和IgG2a抗体反应
2.4 脾脏TNF-α阳性、IFN-γ阳性的CD4+和CD8+ T淋巴细胞占比
2.5 R. equi感染小鼠后离体脾细胞分泌
