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摘要：目的 探讨木犀草素缓解肝纤维化的作用机制。方法 C57BL/6小鼠随机分为对照组、CCl4组、水飞蓟宾组(100 mg·kg-1)、木犀草素组(100 mg·kg-1)，造模10周并干预两周。观察血清转氨酶和肝组织病理，免疫组织化学法和免疫荧光法检测肝纤维化及自噬相关基因表达。培养人肝星状细胞系（LX2）并分组：对照组、TGF-β1组(10 μg·L-1)、TGF-β1+水飞蓟宾组(40 μmol·L-1)、TGF-β1+木犀草素组(40 μmol·L-1)。实时荧光定量聚合酶链式反应、免疫蛋白印迹技术、免疫荧光法、MDC法分析肝纤维化和自噬相关指标。结果 与CCl4组相比，治疗组小鼠肝功能明显改善，肝组织COL1A1、α-SMA表达水平明显下调，且木犀草素疗效更优。与TGF-β1组相比，给药组LX-2细胞COL1A1、ACTA2、MAP1LC3B的mRNA水平下降，SQSTM1的mRNA水平升高，α-SMA、COL1A1蛋白表达减少，p62上调，LC3Ⅱ/Ⅰ比值降低，细胞自噬被抑制，且该作用可被自噬诱导剂雷帕霉素逆转。结论 木犀草素可能通过抑制肝星状细胞自噬缓解肝纤维化。
文章目录
1 材料
1.1 实验动物
1.2 细胞株
1.3 药物与试剂
1.4 仪器
2 方法
2.1 动物实验
2.1.1 动物模型的建立与给药
2.1.2 ALT和AST测定
2.1.3 肝组织病理学染色
2.1.4 组织免疫荧光
2.1.5 免疫组化染色
2.1.6 HYP含量测定
2.2 细胞实验
2.2.1 细胞培养
2.2.2 分组与干预
2.2.3 CCK-8法检测细胞活性
2.2.4 Western blot分析
2.2.5 qRT-PCR检测
2.2.6 免疫荧光
2.2.7 细胞自噬染色
2.3 统计学方法
