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摘要：旨在探讨天山花楸水提物（water extract of Sorbus tianschanica，STE）对哮喘气道炎症的影响及机制。将小鼠随机分为对照组、模型组、阳性药地塞米松组(2 mg·kg-1)、STE低剂量组(1 g·kg-1)、STE中剂量组(2 g·kg-1)、STE高剂量组(4 g·kg-1)。除对照组外，其余各组通过卵清蛋白诱导构建哮喘小鼠模型。通过观察肺组织的病理学变化，并测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素-4（IL-4）和白细胞介素-5（IL-5）水平，以评估STE的抗炎调控作用。进一步采用转录组学和蛋白质组学方法分析肺组织中差异表达的基因与蛋白及其相关信号通路。随后，通过RT-qPCR技术验证关键基因的表达变化，并结合免疫组化和蛋白免疫印迹法探讨STE对哮喘小鼠发病机制的调节作用。最后，运用AutoDock Vina软件开展分子对接，评估STE中主要活性成分与靶蛋白磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基α（PIK3CA）、Toll样受体4（TLR4）、蛋白激酶B1（AKT1）、基质金属蛋白酶9（MMP9）的结合能力。结果显示，模型组小鼠肺组织炎性细胞浸润及纤维组织明显增生，STE干预后上述病理改变显著减轻。与对照组相比，模型组小鼠BALF中IL-4和IL-5水平显著升高，STE干预后IL-4和IL-5水平显著下降。转录组学及蛋白质组学分析筛选出与过敏性哮喘密切相关的关键基因与蛋白，包括肿瘤坏死因子（TNF）、白细胞介素-6（IL-6）、TLR4、PIK3CA、MMP9等。RT-qPCR验证结果显示，STE高剂量干预显著下调哮喘小鼠肺组织中PIK3CA、IL-6、AKT1、MMP9、白细胞介素-13（IL-13）、核因子-κB（NF-κB）、TNF、CXC趋化因子配体1（CXCL1）、TLR4 mRNA的表达，上调信号转导及转录激活因子1（STAT1）mRNA的表达。蛋白免疫印迹及免疫组化结果进一步证实，STE可显著下调哮喘小鼠肺组织中MMP9、TLR4、PIK3CA、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）蛋白的表达。分子对接研究表明，STE中的山柰酚-3，7-二葡萄糖苷、异槲皮苷、槲皮素-3-龙胆二糖苷、金丝桃苷可与PIK3CA、TLR4、AKT1、MMP9稳定结合，表明这些活性成分可能通过靶向调控哮喘相关信号通路，发挥抗炎作用。综上所述，STE通过抑制PIK3CA、MMP9、p-AKT和TLR4的表达，调控TLR4/PI3K/AKT/MMP9信号通路，从而发挥抗哮喘作用。
文章目录
1材料
1.1动物
1.2药物
1.3试剂
1.4仪器
2方法
2.1模型构建
2.2 HE染色测定肺组织炎性浸润
2.3 ELISA法检测炎性因子水平
2.4转录组学
2.5基于串联质谱标签（TMT）的定量蛋白质组学分析
2.6 RT-qPCR实验
2.7蛋白免疫印迹实验
2.8免疫组化实验
2.9分子对接
2.10统计学分析
3结果
3.1 HE染色
3.2 ELISA检测
