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麦秆蝇（Elachiptera decipiens）是在新疆新发现的一种入侵害虫,以幼虫危害小麦茎杆。由于其引起的害状表现与其他麦秆蝇相似而难以区分,给准确的虫情监测造成极大困难。本研究旨在建立基于LAMP技术的麦秆蝇快速、可视化检测方法。基于麦秆蝇的线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ（COⅠ）基因序列,设计LAMP特异性引物,对引物组反应条件进行优化并测试LAMP检测技术灵敏度,并将牙签法提取DNA与LAMP检测体系联合应用对样本进行可视化鉴定。结果表明,所设计的麦秆蝇LAMP引物组特异性良好,优化后的LAMP反应体系为10×Acculso Bca Buffer 2μL,MgSO4（100 mmol/L）1μL,dNTP Mix 3.5μL,FIP/BIP（40μmol/L）1μL,F3/B3 （10μmol/L）0.5μL,甜菜碱（5 mol/L） 3μL,Bca DNA Polymerase 1μL,羟基萘芬蓝HNB（250μmol/L）1μL,无酶无菌水9.5μL,DNA样本1μL;在恒温65℃条件下反应50 min即可完成对麦秆蝇DNA样品的检测,检测灵敏度可达1×10-3 ng/μL。该方法与牙签法提取DNA联用可以在1 h内完成样本鉴定。经过田间虫样检测验证,表明该方法具有高效、灵敏、操作简单等特点,可满足田间虫情调查的现场检测需求。
