摘要：目的：探讨水通道蛋白5（aquaporin 5，AQP5）对干燥综合征（Sj?gren syndrome，SS）大鼠Toll样受体4（Toll-like receptor 4，TLR4）/髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88，MyD88）/核因子κB（nuclear factor κB，NF-κB）信号的影响。方法：从基因表达综合数据库（Gene Expression Omnibus，GEO）中提取SS基因表达数据集GSE406611和GSE84844，使用R软件分析AQP5的mRNA表达。构建大鼠SS模型，将造模成功的大鼠随机分为SS组、SS+NC组和SS+pc组，每组各10只；取10只正常大鼠作为Normal组。Normal组、SS组、SS+NC组大鼠于颌下腺位置每日一次皮下注射10 μg的rno-pcDNA3.1-AQP5-NC，SS+pc组大鼠于颌下腺位置每日一次皮下注射10 μg的rno-pcDNA3.1-AQP5，连续注射28 d。采用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）的含量，采用高通量测序确定靶点基因，采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）和Western blot检测大鼠颌下腺组织中AQP5、TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA水平和蛋白表达情况。结果：在SS数据集GSE406611和GSE84844中，AQP5的mRNA表达明显降低。与Normal组相比，SS组大鼠血清中TNF-α和IL-1β的含量明显升高，TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA和蛋白表达明显升高，AQP5的mRNA和蛋白表达明显降低；过表达AQP5后，SS+pc组大鼠血清中TNF-α和IL-1β的含量明显降低，TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA和蛋白表达明显降低，AQP5的mRNA和蛋白表达明显升高，差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论：AQP5参与SS的进展，AQP5的表达升高能明显抑制炎症性应激，减轻颌下腺组织病理损伤，这可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号的传导有关。
文章目录
1 材料和方法
1.1 在线生物信息的提取
1.2 实验动物、试剂与仪器
1.3 SS大鼠模型的制备
1.4 实验的分组和处理
1.5 各组大鼠唾液分泌量的检测
1.6 各组大鼠颌下腺组织病理活检
1.7 大鼠血清中TNF-α和IL-1β含量的检测
1.8 大鼠颌下腺组织中差异基因的高通量测序
1.9 大鼠颌下腺组织中AQP5、TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA表达
1.10 Western blot检测大鼠颌下腺组织中AQP5、TLR4、MyD88、NF-κB的蛋白表达
1.11 统计学分析
2 结果
2.1 AQP5在SS患者中的表达
2.2 各组大鼠造模状态以及唾液分泌量的比较
2.3 各组大鼠颌下腺组织损伤的病理比较
2.4 各组大鼠血清中炎性因子TNF-α和IL-1β的含量
2.5 大鼠颌下腺组织差异表达基因的高通量测序结果
2.6 各组大鼠颌下腺组织中rno-AQP5、rno-TLR4、rno-MyD88、rno-NF-κB的mRNA表达
2.7 各组大鼠颌下腺组织中AQP5、TLR4、MyD88、NF-κB的表达
3 讨论
