摘要：目的 构建一种双质粒系统评估ISCR28元件的功能，初步评估ISCR28转移armA基因的方式。方法 比较分析Genbank库里含有完整ISCR28元件序列的基因环境，推测ISCR28转移armA基因的三种可能方式。用无缝克隆技术将三种可移动元件分别引入温度敏感型质粒pKD46中，构建重组质粒(供体)，之后与pSTV28(受体)质粒一起导入大肠埃希菌DH5α，构建双质粒系统。引入卡那霉素抗性在42℃条件下培养抑制温敏质粒的复制，使用双抗性平板筛选重组pSTV28质粒的大肠埃希菌。三代基因组测序验证重组质粒的构建和耐药基因的转移情况。通过反向PCR及产物测序检测环状中间体并确定耐药基因转移的最小单元。结果 序列分析表明ISCR28是活跃的元件。双质粒系统构建和验证实验结果表明，当供体质粒携带armA-ISCR28或ISCR28-armA-ISCR28时，即当armA基因下游的ISCR28完整时，能形成环状中间体，通过测序发现这些环状中间体含有armA和下游的ISCR28，而当供体质粒携带ISCR28-armA-ΔISCR28时，即下游ISCR28不完整时，未能获得环状中间体。结论 环状中间体的形成是ISCR28作为转座酶有功能的确切证据。只有armA下游的ISCR28序列完整时，才可介导armA基因和ISCR28序列剪切成环。环状中间体是界定armA基因转移的最小单元，其移动到靶位点序列可能需要整合酶的进一步辅助。本研究首次通过实验证实ISCR28的转座酶功能，填补了ISCR家族元件功能研究的空白。研究成果为解析耐药基因通过可移动元件的传播路径提供了直接证据，对遏制临床耐药菌播散具有重要参考价值。
