摘要：目的 建立新型非病毒载体介导的基因递送/表达体系，将活体局部骨骼肌细胞改造成“智能化药物生产工厂”，生产治疗性蛋白类药物，通过血液循环到达并识别其靶点（分子、细胞、器官或组织），为机体提供持续不断的蛋白类药物供给。方法 首先，将液态全氟己烷（perfluorohexane, PFH）引入脂质体（liposome,Lipo）内形成Lipo-PFH脂质微泡，通过定向超声波调控使PFH发生液-气相变，产生超声靶向微泡破坏（ultrasound-targeted microvesicle destruction, UTMD）效应，将Lipo-PFH脂质微泡搭载的质粒DNA（plasmid DNA,pDNA）高效、安全传递到骨骼肌细胞中进行表达。然后，通过琼脂糖凝胶电泳探究Lipo和pDNA在不同质量比条件下的结合情况；采用人胚肾细胞HEK-293T和小鼠成肌细胞C2C12评估Lipo-PFH的细胞毒性；采用琼脂糖凝胶孔洞模型研究超声波引发Lipo-PFH发生相变的情况；利用表达报告基因的质粒pLuc进行体内基因递送效率的优化。最后，利用表达免疫检查点抑制剂的功能质粒（基因药物，pα-PD-1和pα-CTLA-4）对黑色素瘤荷瘤小鼠进行治疗，评估治疗效果。结果 （1）Lipo平均粒径和Zeta电位分别为139.4 nm和33.1 mV;Lipo-PFH平均粒径和Zeta电位分别为261.6 nm和39.6 mV。琼脂糖凝胶电泳筛选出最佳的复合质量比为7∶1，并通过Zeta电位分析进行证实。（2）Lipo-PFH浓度增加到50%，细胞活力依然保持在90%左右。（3）体外条件下证实温度60℃或超声功率2 W/cm2、时间2 min可引发Lipo-PFH中的PFH产生液-气相变，进而在体内条件下优化超声功率和时间对Lipo-PFH中PFH相变的影响。（4）以2 W/cm2、3 min超声21 d仍可检测到荧光素酶表达信号。治疗组小鼠肿瘤生长缓慢（24d内均维持在100 mm3左右），肿瘤质量最小，小鼠生存率最高，瘤内浸润的CD8+T细胞比例显著增加。治疗20 d后，病理学分析显示各组小鼠心、肝、脾、肺、肾和肌肉等均未见病理改变。结论 利用脂质微泡技术，将表达PD-1和CTLA-4抗体的质粒高效递送到黑色素瘤小鼠骨骼肌细胞中，为自体持续生产、供给抗体药物，可安全有效地控制黑色素瘤的生长。
