摘要：目的 探讨NAT10对肾透明细胞癌糖酵解代谢的影响并进一步研究其对肿瘤细胞免疫逃逸的作用。方法 通过TCGA数据库分析临床样本中NAT10表达水平与肾透明细胞癌患者预后的关联；慢病毒稳转方法构建过表达NAT10细胞株；CCK-8评估肾透明细胞癌细胞（ACHN和Caki-1）增殖能力变化；划痕实验评估ACHN和Caki-1细胞迁移能力变化；免疫荧光检测NAT10过表达后ACHN和Caki-1细胞糖酵解关键基因GLUT1、HK2、LDHA、MCT4以及肿瘤细胞表面PD-L1水平的表达；乳酸检测试剂盒评估肾透明细胞癌细胞乳酸LDHA水平变化；NAT10过表达后ACHN和Caki-1细胞与CD8+ T细胞共培养，CCK-8评估T细胞增殖以及ELISA检测IFN-γ和TNF-α分泌变化；NAT10过表达后ACHN和Caki-1细胞与肿瘤相关巨噬细胞TAMs共培养，评估检测M2型巨噬细胞极化比例以及ELISA检测IL-10和TGF-β1分泌变化。结果 NAT10高表达与患者生存期显著缩短相关。过表达NAT10后，ACHN和Caki-1细胞的增殖能力和侵袭能力均显著增强。此外，过表达NAT10导致ACHN和Caki-1细胞中糖酵解关键基因GLUT1、HK2和LDHA以及PD-L1的表达水平显著增加。在共培养体系中，过表达NAT10的ACHN和Caki-1细胞显著抑制CD8+ T细胞增殖，并降低IFN-γ的分泌水平。在肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）共培养实验中，过表达NAT10的ACHN和Caki-1细胞显著提高了M2型极化比例同时促进IL-10和TGF-β1分泌。结论 NAT10通过调控GLUT1、HK2和LDHA的表达，影响肾透明细胞癌的糖酵解代谢重编程，并促进免疫逃逸。
文章目录
1 材料和方法
1.1细胞和试剂
1.2 慢病毒转染构建过表达细胞系
1.3 CCK-8
1.4 Trans-well
1.5 免疫荧光
1.6 乳酸试剂盒评估乳酸变化
1.7 肾透明细胞癌细胞与CD8+ T细胞共培养
1.8 ELISA检测IFN-γ、TNF-α、IL-10、TGF-β1表达
1.9 RT-qPCR
1.10 肾透明细胞癌细胞与TAMs共培养
1.11 免疫组化
1.12 TCGA数据库分析临床样本
1.13统计学分析
2结果
2.1 NAT10在ccRCC中具有潜在的致癌作用
2.2 NAT10基因上调促进ccRCC细胞的增殖和迁移能力
2.3 NAT10基因上调促进ccRCC细胞糖酵解关键基因表达
2.4 NAT10基因上调促进ccRCC细胞表面PD-L1表达
2.5 NAT10基因上调抑制CD8+ T细胞增殖和降低IFN-γ和TNF-α的分泌水平
2.6 NAT10基因上调促进TAMs向M2型极化和增加IL-10和TGF-β1分泌水平
3讨论
