摘要：通过对灵芝单核菌株以单单杂交的方法构建一对同核异质体，对亲本和杂交菌株采用体细胞不亲和与分子标记方法协同分析同核异质体的细胞核与细胞质来源，采用固体平板与液体发酵培养进行综合分析。通过单单杂交得到的2个杂交子与亲本间均具有不亲和性，通过ITS引物鉴定杂交子具有相同的细胞核，通过线粒体基因差异性片段鉴定杂交子S1细胞质来源于亲本F213，S2来源于亲本H53，灵芝同核异质菌株构建成功。同核异质菌株在平板培养时，生长速率、菌落形态差异显著，S2菌株的生长速率是S1菌株1.16倍。同核异质菌株在液体发酵时，S2与S1在生物量、漆酶活性、Laccase基因相对表达量、可溶性蛋白含量及产量、多糖含量及产量、三萜及甾醇产量差异显著，S2分别是S1的1.52、1.28、2.46、1.08、1.65、1.10、1.67、1.44倍；三萜及甾醇含量差异不显著。研究建立了灵芝同核异质体简便有效的鉴定方法，具有耗时短、成本低的优势，证实单单杂交中存在母本优势，为灵芝定向育种提供数据参考。
文章目录
1 材料与方法
1.1 供试菌株
1.2 试剂与仪器
1.3培养基
1.4 试验方法
1.4.1 菌种活化
1.4.2 单单杂交
1.4.3 同核异质体的体细胞不亲和验证
1.4.4 同核异质体的分子标记验证
1.4.5 平板培养菌丝形态学观察
1.4.6 平板培养生长速度测定
1.4.7 液体发酵培养
1.4.8 液体发酵过程漆酶活性测定
1.4.9 发酵菌丝体Laccase基因相对表达量测定
1.4.10 液体发酵过程菌丝体产量测定
1.4.11 发酵菌丝体的可溶性蛋白含量的测定与产量的计算
1.4.12 发酵菌丝体的多糖含量的测定与产量的计算
1.4.13 发酵菌丝体的三萜及甾醇含量的测定与产量的计算
2.结果与分析
2.1 同核异质体菌株的体细胞不亲和验证
2.2 同核异质体菌株
