摘要：为挖掘大豆耐磺酰脲类除草剂（Sulfonylurea Herbicides， SUs）的关键基因，聚焦乙酰乳酸合成酶（Acetolactate Synthase， ALS）基因GmALS2，探究其第574位色氨酸突变为甘氨酸（W574G）对大豆耐苯磺隆（Tribenuron-methyl， TBM）能力的影响。分析GmALS2基因在大豆不同组织及TBM胁迫下幼苗中的表达水平，随后克隆该基因，并通过重叠PCR技术构建其W574G定点突变基因GmALS2(WG)。功能验证显示，GmALS2与GmALS2(WG)在酵母中表达后，均能提升酵母在含TBM培养基上的存活能力，且GmALS2(WG)的提升效果更显著；在大豆发状根中分别表达两个基因后，通过检测ALS酶底物丙酮酸的积累量，进一步证实GmALS2(WG)能更显著增强大豆发状根对TBM的耐受性。GmALS2基因W574G突变可增强大豆对TBM的耐受性，为筛选新的耐除草剂ALS突变位点及验证方案提供了参考。
文章目录
1 材料与方法
1.1 大豆不同组织及苯磺隆胁迫材料的采集
1.2 荧光定量PCR技术检测基因表达量
1.3 大豆GmALS2基因的克隆及突变基因GmALS2(WG)的构建
1.4 大豆GmALS2及其突变基因GmALS2(WG)在酵母细胞中的表达分析
1.5 大豆GmALS2及其突变GmALS2(WG)基因在大豆发状根中的表达分析
2 结果与分析
2.1 大豆GmALS2基因在不同组织及苯磺隆胁迫下的表达分析
2.2 大豆GmALS2基因的克隆及突变体GmALS2（WG）的构建
2.3 大豆GmALS2及其突变基因GmALS2(WG)在酵母细胞中的耐除草剂功能分析
2.4 大豆GmALS2及其突变基因GmALS2(WG)在大豆发状根中的耐除草剂功能分析
3 讨 论
