摘要：为了探究罗氏沼虾ATP合酶寡霉素敏感相关蛋白（OSCP）亚基基因在ATP合酶结构完整性和功能稳定性中的作用。采用RACE技术克隆获得OSCP亚基cDNA全长，siRNA干扰罗氏沼虾OSCP亚基基因的表达的方法，进行了ATP合酶其他亚基基因表达量的变化的研究。结果显示，罗氏沼虾ATP合酶OSCP亚基基因cDNA全长922 bp，编码209个氨基酸，为疏水性蛋白。同源性对比和进化关系分析表明，罗氏沼虾OSCP亚基基因与美国龙虾同源性最高、亲缘关系最近。组织定量PCR结果显示，OSCP亚基基因表达量在罗氏沼虾心脏组织中最高。利用siRNA对罗氏沼虾OSCP亚基基因表达进行抑制，有效siRNA的最适注射剂量为1.2 μg/g，当罗氏沼虾心脏中OSCP亚基基因的表达下调时，ATP合酶α、β、γ、δ、b和d亚基基因表达量出现显著下调（P<0.05）。研究表明OSCP亚基基因的表达受到抑制时，会影响ATP合酶其它亚基的基因表达，进而影响ATP合酶的合成。
文章目录
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
1.2.1组织选取
1.2.2总RNA提取及cDNA合成
1.2.3 ATP合酶OSCP亚基基因全长克隆
1.2.4 ATP合酶OSCP亚基基因序列分析
1.2.5 OSCP亚基各组织的表达分析
1.2.6 有效siRNA筛选
1.2.7 siRNA注射剂量筛选
1.2.8 siRNA干扰后ATP合酶其它亚基基因表达量的测定
1.3 数据统计与分析
2 结果与分析
2.1 OSCP亚基克隆与序列分析
2.2 OSCP亚基预测氨基酸同源性和系统发育树分析
2.3 OSCP亚基组织表达分析
2.4 3条siRNA的干扰效果
2.5 不同剂量siRNA对OSCP亚基表达干扰情况
2.6 siRNA干扰后在心脏中ATP合酶 α、β、γ、δ、b和d亚基基因表达量的变化
3 讨论
3.1 OSCP亚基基因序列信息及基因表达
