摘要：为了研究4型肽基精氨酸脱亚胺酶(peptidyl arginine deimidase type 4, PAD4)在炎症脂肪组织中的作用及机制,分别提取db/db[Ⅱ型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)组]、 db/m(T2DM对照组)、 ob/ob(肥胖组)和ob/c(肥胖对照组)4组小鼠皮下和内脏脂肪组织,免疫组化技术检测PAD4在T2DM和肥胖小鼠皮下和内脏脂肪组织中的表达情况; LPS刺激野生型小鼠原代腹腔巨噬细胞和小鼠巨噬细胞系RAW264.7, qRT-PCR和Western blotting检测两种细胞中PAD4、炎性因子TNF-α和IL-6的表达以及NF-κB信号通路的激活情况。结果显示,与db/m、 ob/c两组小鼠相比, db/db、 ob/ob两组小鼠中皮下和内脏脂肪组织、经LPS刺激的小鼠原代腹腔巨噬细胞和RAW264.7细胞中PAD4的表达均降低,炎性因子TNF-α和IL-6的表达均明显升高;同时TLR4/NF-κB信号通路激活。该研究表明PAD4在炎症状态下(T2DM和肥胖)的皮下和内脏脂肪组织中表达下降,并与TLR4/NF-κB信号通路激活呈负相关。
文章目录
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物
1.1.2 主要试剂
1.2 方法
1.2.1 动物实验分组及造模取材
1.2.2 细胞培养
1.2.3 细胞提取、 培养与LPS干预
1.2.4 免疫组织化学
1.2.5 Western blotting
1.2.6 qRT-PCR
1.3 统计学处理
2 结果
2.1 糖尿病小鼠的脂肪组织中PAD4表达降低
2.2 肥胖小鼠脂肪组织中PAD4表达降低
2.3 肥胖小鼠和糖尿病小鼠脂肪组织炎性因子水平升高
2.4 LPS刺激的原代腹腔巨噬细胞中PAD4表达降低、 促炎因子表达升高
2.5 LPS刺激的RAW264.7细胞中PAD4表达降低、 促炎因子表达升高
2.6 抑制PAD4会促使促炎因子表达升高
2.7 糖尿病和肥胖小鼠的脂肪组织中TLR4/NF-κB信号通路被激活
2.8 LPS刺激巨噬细胞中TLR4/NF-κB信
