摘要：旨在开发针对非酒精性脂肪肝病（NASH）的关键靶点细胞死亡诱导DNA碎片因子样效应物B（CIDEB）的小干扰RNA（siRNA），以实现对CIDEB蛋白的长效、安全的抑制效果。针对CIDEB设计不同人源化siRNAs序列，通过在细胞水平导入人源化psiCHECK-CIDEB双荧光素酶报告基因构建细胞模型进行初步体外活性筛选；对筛选出的siRNAs进行化学修饰并进一步筛选和优化；最后针对优化后的siRNA化学合成GalNAc-siRNA偶联物，并构建CIDEB转基因动物模型进行体内活性评价以获得对CIDEB信使RNA（mRNA）有显著沉默效应的候选序列，设置10、30、50 mg/kg三个不同给药剂量梯度，对优选序列进行早期体内安全性评价。体内活性实验表明，优化后的siRNA可显著且长效地抑制转基因小鼠体内CIDEB表达（相对抑制率﹥80%，持续4周）；初步安全性评价血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶、脏器系数及HE染色均表明高剂量给药未引发明显的肝脏毒性。因此，该CIDEB突变体的siRNA疗法通过精准调控NASH进展关键靶点，为需长期用药的慢性肝病患者提供更安全持久的治疗选择。
文章目录
1材料与方法
1.1仪器
1.2材料和试剂
1.3实验动物
1.4 siRNA序列的初步活性筛选
1.5 GalNAc-siRNA的活性筛选
1.5.1 GalNAc-siRNA的合成优化
1.5.2 SEAP报告基因质粒提取和转基因小鼠模型构建
1.5.3 SEAP-CIDEB报告基因小鼠分组和给药
1.6 GalNAc-siRNA初步安全性评价
1.7数据分析
2结果与分析
2.1 siRNA序列的初步活性筛选结果
2.2 优势GalNAc-siRNA的体内药效评价与表征
2.3 GalNAc-siRNA的初步安全性评价
3 讨 论
4 结 论
