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摘要：【目的】筛选出一种抗多杀性巴氏杆菌的乳酸菌细菌素,完成乳酸菌全基因组测序,分析其细菌素理化特性和杀菌机制。【方法】将健康猫粪便接种于MRS肉汤培养基,37℃培养12 h分离细菌。以多杀性巴氏杆菌为指示菌,通过牛津杯琼脂扩散法测定分离的乳酸菌的抑菌活性,通过16S rRNA基因扩增鉴定分离的乳酸菌,并对其进行全基因组序列测定及KEGG功能注释。采用蛋白酶敏感、热稳定性、酸碱稳定性试验测定分离菌产抑菌物质的生物学特性,运用扫描电镜技术探究抑菌物质的抗菌特性。【结果】筛选出1株产抑菌物质的乳酸菌,其菌落表面光滑,形态较小;革兰染色后呈阳性球菌。16S rRNA测序分析显示,分离菌与融合魏斯氏菌相似性为97%,鉴定为融合魏斯氏菌,命名为JLP1。全基因组测序结果显示,融合魏斯氏菌JLP1基因组大小为2 350 892 bp,有效平均GC含量为44.94%,检测到2 020个编码基因。在KEGG数据库中共有1 051个基因得到注释,分别为环境信息处理、新陈代谢和遗传信息处理系统三大功能,共有49条代谢通路。排酸和排过氧化氢试验结果表明,融合魏斯氏菌JLP1抑菌物质并非有机酸和过氧化氢,经蛋白酶K处理后抑菌活性明显下降,推测其抑菌物质为细菌素。在40～80℃内融合魏斯氏菌JLP1所产细菌素抑菌活性稳定,100℃处理10 min不失活,具有良好的热稳定性;在pH 3.0～8.0内具有良好抑菌活性,酸碱耐受范围较大。电子显微镜扫描结果显示,融合魏斯氏菌JLP1所产细菌素攻击多杀性巴氏杆菌的细胞膜,形成孔隙,细胞表面皱缩。【结论】融合魏斯氏菌JLP1新陈代谢和氨基酸生物合成基因较多,菌株所产细菌素理化特性稳定且抑菌效果良好,为防治多杀性巴氏杆菌感染提供有利参考。
文章目录
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 乳酸菌分离纯化
1.3 乳酸菌鉴定
1.4 乳酸菌分离株全基因组测序
1.5 乳酸菌分离株抑菌物质抑菌活性测定
1.6 乳酸菌分离株抑菌物质生物学特性测定
1.6.1 无菌上清液有机酸、过氧化氢排除试验
1.6.2 酶稳定性试验
1.6.3 热稳定性测试
1.6.4 酸碱稳定性试验
1.7 乳酸菌分离株抑菌物质抗菌特性
2 结 果
2.1 乳酸菌菌株的分离
2.2 乳酸菌菌株鉴定
2.3 JLP1全基因组测序分析
2.4 JLP1所产抑菌物质抑菌活性测定结果
2.5 融合魏斯氏菌JLP1抑菌物质生物学特性
2.5.1 有机酸、过氧化氢抑菌排除试验
2.5.2 酶稳定性试验
2.5.3 热稳定性试验
2.5.4 酸碱稳定性试验
2.6 融合魏斯氏菌JLP1产细菌素对指示菌结构完整性的影响
3 讨 论
4 结 论
