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摘要：目的：研究加味补阳还五汤通过PTEN诱导假定蛋白激酶1/E3泛素连接酶（PINK1/Parkin）通路介导线粒体自噬途径对脑缺血再灌注小鼠的影响，探讨加味补阳还五汤改善脑缺血再灌注的作用机制。方法：将72只C57BL/6J雄性小鼠随机分为6组，每组12只，包括假手术组、大脑中动脉闭塞再灌注模型组（MCAO/R）组、加味补阳还五汤低、中、高剂量组(8.84、17.68、35.36 g·kg-1·d-1)和阿司匹林组(13.00 mg·kg-1·d-1)。采用Zea-Longa法评估神经功能缺损评分；2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色测定脑梗死体积比；苏木素-伊红染色（HE）和尼氏染色观察脑组织病理与神经元损伤；脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）法观察细胞凋亡；透射电镜观察小鼠脑组织线粒体超微结构；酶联免疫吸附测定法检测血清中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平；实时荧光定量逆转录PCR（RT-qPCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测脑组织PINK1、Parkin、微管相关基因轻链3（LC3B， LC3II/LC3I）、p62的mRNA和蛋白表达。结果：与假手术组比较，模型组小鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积比显著升高（P<0.01），脑梗死侧皮层损伤严重，表现为神经元密度降低、胞体空泡化、核固缩，尼氏体数量显著减少，部分锥体细胞胞质内尼氏体溶解、边界模糊，TUNEL阳性细胞数量显著升高（P<0.01），线粒体伴随嵴膜断裂和基质空泡化，线粒体外膜破裂，形成自噬体且数量显著增加，血清中SOD活性显著降低（P<0.01），MDA含量显著升高（P<0.01），模型组小鼠脑梗死组织中PINK1、Parkin、LC3B mRNA相对表达量和蛋白表达显著升高（P<0.05， P<0.01），p62 mRNA和蛋白表达显著降低（P<0.05， P<0.01），具有统计学意义；与模型组比较，各给药组神经功能缺损评分和脑梗死体积比显著降低（P<0.01），神经元密度显著上升，胞体空泡化现象减轻，细胞核形态趋于规则，细胞核逐渐清晰，尼氏体分布密度显著升高，溶解现象减轻，轮廓清晰度提升，线粒体嵴膜结构部分重建，部分呈现自噬体包裹现象，线粒体破坏程度减轻，血清中SOD活性显著升高（P<0.01），MDA含量显著降低；PINK1、Parkin、LC3II/LC3I mRNA和蛋白表达显著升高（P<0.05， P<0.01），加味补阳还五汤低剂量组和中剂量组的p62 mRNA和蛋白表达显著降低（P<0.05， P<0.01），具有统计学意义。结论：加味补阳还五汤可上调PINK1、Parkin及LC3II/LC3I蛋白表达水平，下调p62蛋白表达，揭示其可能通过调节PINK1/Parkin信号通路相关蛋白表达，对脑缺血再灌注损伤产生改善作用，调控线粒体自噬通路可能是加味补阳还五汤缓解小鼠脑缺血再灌注损伤的作用途径之一。
文章目录
1 材料
1.1 动物与饲料
1.2 药物
1.3 试剂
1.4 仪器
2 方法
2.1 分组、造模及给药
2.2 神经功能评分
2.3 TTC染色
2.4 HE染色和尼式染色
2.5 TUNEL染色
2.6 透射电镜观察脑梗死侧线粒体超微结构
2.7 ELISA检测氧化应激水平
2.8 实时荧光定量逆转录PCR（Real-time RT-PCR， RT-qPCR）
2.9 蛋白免疫印迹法（Western blot）
2.10 统计学处理
3 结果
3.1 GQTMM对MCAO/R小鼠神经功能和脑梗死体积的影响
3.2 GQTMM对MCAO/R小鼠脑组织形态学的影响
3.3 GQTMM对MCAO/R小鼠脑梗死侧细胞凋亡的影响
3.4 GQTMM对MCAO/R小鼠脑梗死侧线粒体超微结构的影响
3.5 GQTMM对MCAO/R小鼠氧化应激的影响
3.6 对小鼠脑梗死
