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摘要：【背景】粪肠球菌(Enterococcus faecalis)是一种重要的条件性致病菌，可引起人类和多种动物感染。然而，由于其固有耐药性和不断增强的多重耐药性，使得临床治疗面临严峻挑战。【目的】为了探究小檗碱(Berberine， BBR)对粪肠球菌毒力因子转录表达及其致病相关功能表型的影响，给粪肠球菌感染的治疗提供参考。【方法】本研究首先采用二倍稀释法测定小檗碱对粪肠球菌N9株的最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration， MIC)。然后再使用亚抑菌浓度的小檗碱(1/2 MIC、1/4 MIC和1/8 MIC)对粪肠球菌N9株进行处理，并采用荧光定量PCR方法检测其毒力因子的转录表达情况，同时使用结晶紫染色法评估其生物膜的形成能力、借助细胞粘附试验分析其对猪小肠上皮细胞系IPEC-J2的粘附效果以及通过明胶液化试验验证其液化明胶的能力。【结果】小檗碱对粪肠球菌N9株的MIC为625 μg/mL。亚抑菌浓度的小檗碱(1/2 MIC和1/4 MIC)不仅能够显著抑制粪肠球菌N9株的菌毛相关毒力因子(ebpA、ebpB、ebpC、ebpR和rnjB)、生物膜相关毒力因子(esp、ace、psr、srtA和atn)和液化明胶相关毒力因子(fsrA、fsrB、fsrC、sprE和gelE)的转录表达，而且能够显著降低其生物膜的生成量、减少其对IPEC-J2细胞的粘附数量和阻断其对明胶的液化效果。【结论】小檗碱能够有效抑制粪肠球菌N9株的致病相关毒力因子的转录表达以及生物膜形成、细胞粘附和明胶液化的能力。表明小檗碱可能作为一种潜在的抗粪肠球菌感染药物。
文章目录
1 材料与方法
1.1 菌株与细胞
1.2 培养基、主要试剂及仪器
1.3 菌株的培养
1.3.1 菌种活化
1.3.2 生长曲线的测定
1.4 最小抑菌浓度测定
1.5 抑菌曲线的测定
1.6 小檗碱对粪肠球菌毒力因子转录表达的影响
1.6.1 引物设计与合成
1.6.2 RNA 提取和反转录
1.6.3 毒力因子的普通PCR扩增
1.6.4 毒力因子的荧光定量PCR扩增
1.7 小檗碱对粪肠球菌生物膜形成能力的影响
1.8 小檗碱对粪肠球菌细胞粘附能力的影响
1.9 小檗碱对粪肠球菌明胶液化能力的影响
1.10 统计学分析
2 结果与分析
2.1 粪肠球菌N9株的生长曲线
2.2 小檗碱对粪肠球菌N9株MIC的测定结果
2.3 小檗碱对粪肠球菌N9株的抑菌曲线
2.4 毒力因子的普通PCR扩展结果
2.5 小檗碱对粪肠球
