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摘要：本研究旨在建立腺病毒载体疫苗病毒颗粒数的检测方法。采用纳米流式技术在单颗粒水平上对腺病毒载体疫苗的病毒颗粒数进行分析，选择与病毒折射率接近的单分散二氧化硅纳米颗粒作为标准粒径参考品，计算病毒的粒径，并与透射电子显微镜测定结果比较，从而确定圈门策略，再通过颗粒数标准品计算病毒颗粒数。经验证，建立的方法线性、准确度、中间精密度和专属性良好，病毒颗粒数测定结果与感染性滴度有良好的相关性。相较于传统OD260法，纳米流式技术可以直接测定病毒颗粒数，并通过粒径和颗粒数的变化提示病毒是否发生解体，能更真实地反映样品的实际感染效力。
文章目录
1 材料与方法
1.1 主要仪器
1.2 主要试剂及测试样品
1.3 纳米流式检测
1.3.1 仪器检测性能校准
1.3.2 nanoFCM腺病毒颗粒数测定
1.4 酶联免疫斑点技术(enzyme-linked immunospot assay， ELISpot)测定感染性滴度
1.5 透射电镜检测
1.6 OD260法检测
2 结果与分析
2.1 nanoFCM检测性能校准结果
2.2 nanoFCM病毒颗粒数测定方法学验证
2.2.1 专属性
2.2.2 线性
2.2.3 准确度
2.2.4 中间精密度
2.3 样品测定
2.4 nanoFCM和OD260法检测结果的比较
2.5 nanoFCM监测长期稳定性
3 讨论与结论
作者贡献声明
作者利益冲突公开声明
