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摘要：【目的】对云杉COMT基因进行克隆、序列特征和表达特性分析，为抗性云杉树种选育提供理论基础。【方法】以粗枝云杉为试验材料，通过RT-PCR技术对COMT基因（PaCOMT）进行克隆；利用生物学信息学对该基因进行序列分析；通过实时荧光定量PCR技术分析基因在不同组织及逆境胁迫下的表达情况；利用原核表达系统进行蛋白表达和纯化。【结果】PaCOMT具有一个1095 bp的开放阅读框，编码364个氨基酸。PaCOMT蛋白具有O-甲基转移酶家族的5个保守区和2个催化活性位点。系统进化分析表明，PaCOMT与海岸松COMT亲缘关系最近。PaCOMT的三级结构由1个二聚化结构域和2个催化结构域组成。qRT-PCR分析表明，PaCOMT在粗枝云杉的嫩枝和根中相对表达量最高，针叶中的PaCOMT在被落针病菌侵染后表达显著上调。SDS-PAGE分析表明，在大肠杆菌中表达的重组PaCOMT分子量约为43 kDa，纯化的重组PaCOMT浓度为0.41 mg/mL。【结论】这些结果表明PaCOMT可能在粗枝云杉的抗病性中发挥重要作用，并为进一步探明PaCOMT的酶功能奠定基础。
文章目录
1 材料和方法
1.1 试验材料
1.2 RNA提取和cDNA合成
1.3 分子克隆
1.4 生物信息学分析
1.5 qRT-PCR
1.6 蛋白质表达和纯化
2 结果与分析
2.1 PaCOMT序列分析
2.2 PaCOMT系统发育分析
2.3 同源建模
2.4 PaCOMT基因表达特性
2.5 重组PaCOMT的表达、优化和纯化
3 讨论
