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摘要:评估左归丸(ZGW)减轻雷公藤多苷(TG)卵巢毒性的作用并利用蛋白组学方法探讨其减毒机制。32只SPF级2月龄雌性SD大鼠随机分为空白(CON)组(10只)和模型组(22只),对模型组大鼠连续灌胃2周TG(50 mg·kg-1· d-1)构建卵巢损伤模型,将造模成功的大鼠(20只)随机分为TG组、左归丸(ZGW)组(1.875 g·kg-1·d-1),每组10只,连续灌胃4周,灌胃期间统计大鼠动情周期,灌胃结束后测量大鼠体重、卵巢及子宫指数,酶联免疫吸附测定法测定血清性激素水平,苏木精-伊红(HE)染色观察卵巢组织病理损伤,Label Free定量蛋白质组学技术进行分析,并通过Western Blot验证富集通路的蛋白表达情况。ZGW能有效调节TG诱导的雌性大鼠动情周期及性激素水平变化,显著减少闭锁卵泡产生(p<0.0001)。蛋白组学表明,与CON组相比,TG组有203个差异蛋白,经过TG治疗后,有28个差异蛋白显著回调,KEGG富集分析涉及鞘糖脂生物合成、糖胺聚糖降解、其他聚糖降解、细胞凋亡等信号通路。Western Blot结果表明,ZGW可以下调细胞凋亡信号通路上的细胞色素C(Cycs)、聚ADP核糖聚合酶家族成员3(Parp3)、细胞凋亡调节因子Bax(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)和上调B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白表达。ZGW可以调节由Cycs、Parp3、Bax、caspase-3、Bcl-2等介导的细胞凋亡信号通路,发挥减轻TG对卵巢组织损伤的作用。
文章目录
引言
1 材料
1.1 动物
1.2 伦理审查
1.3 药物
1.4 主要试剂和仪器
2 方法
2.1 TG致卵巢毒性模型建立和治疗
2.2 样本采集
2.3 指标检测
2.3.1 卵巢、子宫脏器指数
2.3.2 血清FSH、LH、T、E2、P含量
2.3.3 子宫、卵巢病理形态观察及卵泡数统计
2.4 蛋白质组学
2.4.1 卵巢组织样本蛋白提取及分析
2.4.2 蛋白质鉴定和质谱数据分析
2.4.3 蛋白质生信分析
2.5 Western blot assay
2.6 统计分析
3、结果