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摘要：为探讨外源赤霉素对云南松生长发育的影响，及其关键合成酶基因GA20ox的表达分析。选用云南松幼苗为材料，分别以100、200和300 mg/L浓度梯度赤霉素及赤霉素抑制剂多效唑进行外源喷施处理，观察其苗高、地径变化。同时通过对云南松转录组数据的筛选、比对，获得一条GA20ox基因的同源序列，利用RT-PCR技术进行基因克隆，并进行生物信息学分析、密码子偏好性分析和基因表达分析。结果显示，表明：不同浓度梯度下，外源200 mg/L赤霉素显著促进云南松苗高生长，而100 mg/L赤霉素则显著促进其地径生长。通过克隆所得的云南松GA20ox(PyGA20ox) GenBank登录号为OR651279，其编码区长度为1107 bp，编码368个氨基酸，理论相对分子质量为41.7 kDa。密码子偏好性分析表明，该基因偏好使用以A/U结尾的密码子，酵母适合作为该基因微生物异源表达受体，烟草和拟南芥均适合作为该基因遗传转化及功能研究的受体材料。荧光定量PCR结果显示，PyGA20ox在根、茎、叶以及茎尖均有表达，且相对在茎中显著表达，而不同植物生长调节剂处理下该基因表达模式不同。综上所述，通过外源植物生长调节剂处理确定了赤霉素对云南松生长的显著促进作用，及其适宜喷施浓度为200 mg/L，并对赤霉素生物合成途径中的关键酶PyGA20ox进行了克隆与表达分析。
文章目录
1 材料和方法
1.1 试验材料与试验处理
1.2 生长指标测定
1.3 总RNA的提取及反转录cDNA合成
1.4 目的基因的克隆
1.5 生物信息学分析
1.6 密码子偏好性分析
1.7 基因表达分析
2 结果分析
2.1 不同植物生长调节剂处理对云南松苗高、地径生长的影响
2.2 云南松GA20ox基因的克隆与理化性质分析
2.3 生物信息学分析
2.4 多序列比对和系统进化分析
2.5 PyGA20ox密码子偏好性分析
2.6 与模式物种密码子使用频率比较分析
2.7 蛋白质二级、三级结构分析和蛋白互作分析
2.8 云南松GA20ox基因的表达分析
3 结论与讨论
