目的 采用CRISPR/Cas9技术构建髓细胞触发受体2 （TREM2）基因敲除(TREM2-/-)小鼠,繁育TREM2-/-小鼠并分析其基因型。方法 采用CRISPR/Cas9技术选择性敲除TREM2基因的外显子2～3区域,构建TREM2-/-小鼠模型,所有小鼠的遗传背景均为C57BL/6J。采用聚合酶链式反应（PCR）法鉴定小鼠的基因型。实时荧光定量PCR（qPCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测小鼠主要组织中TREM2的表达水平,从mRNA水平和蛋白水平上验证PCR鉴定结果的真实性以及科学性。根据sgRNA序列在CCTop网站预测出可能存在的脱靶位点,提取小鼠尾部DNA经PCR扩增后进行Sanger测序,检测TREM2-/-小鼠有无产生脱靶效应。结果 通过CRISPR/Cas9技术成功构建了TREM2-/-小鼠,并对小鼠进行了基因型鉴定,琼脂糖凝胶电泳结果显示,仅扩增出415 bp条带的小鼠基因型为野生型（WT）;仅扩增出449 bp条带的小鼠基因型为TREM2-/-;扩增出415 bp和449 bp双条带的小鼠基因型为杂合型。qPCR结果显示,与WT小鼠相比,TREM2-/-小鼠的心脏、脑组织中TREM2的mRNA表达水平均下调（P<0.01）,胸腺、肺组织中TREM2的mRNA表达也呈现下降趋势（P<0.05）。Western blot结果显示,与WT小鼠相比,TREM2-/-小鼠的心脏、脑、胸腺、肺组织以及外周血单个核细胞（PBMC）中TREM2的蛋白表达水平均降低（P<0.01）。Sanger测序结果表明TREM2-/-小鼠没有产生脱靶效应。结论 成功构建并繁育了TREM2-/-小鼠,建立了一种可靠的基因型鉴定方法,并采用qPCR、Western blot以及Sanger测序分析,验证了小鼠模型遗传的稳定性,将为TREM2基因功能的研究提供重要的基因动物模型。
