目的:克隆茅苍术Al CYP71FS9基因,了解该基因在苍术品质形成的过程中可能发挥的作用。方法:根据转录组测序信息设计引物,采用聚合酶链式反应(PCR)对茅苍术Al CYP71FS9基因进行扩增及克隆,利用在线软件对Al CYP71FS9基因编码蛋白进行生物信息学预测。构建35S启动的PCNG绿色荧光蛋白瞬时表达载体,利用激光共聚焦显微镜对该基因的亚细胞定位进行实测验证。采用实时荧光定量q RT-PCR技术分析该基因在茅苍术不同组织中的相对表达量。结果:茅苍术Al CYP71FS9基因开放阅读框(ORF)的长度为1 491 bp,编码497个氨基酸;相对分子质量为56.77 k Da,等电点为7.16,属于亲水性蛋白,且存在P450酶共识别序列Fxx Gx Rx Cx G、PERF结构域以及Exx R结构域,属于细胞色素P450超家族成员;Al CYP71FS9基因编码蛋白定位于细胞的内质网;该基因在茅苍术老根茎中的表达量最高,且与茅苍术的茎、叶和嫩根茎均存在显著性差异(P<0.01)。结论:该研究成功克隆到与茅苍术中萜类化合物合成相关的Al CYP71FS9基因,为今后深入开展Al CYP71FS9基因功能及其对茅苍术品质优劣的影响等研究奠定了必要的基础。
