[目的]建立一种新的优化的小鼠中脑黑质取材方法,用于检测帕金森病(Parkinson′s disease,PD)小鼠黑质区域的细胞和分子改变。[方法] 2月龄C57BL/6J小鼠随机分为传统组织定位取材组和脑片定位取材组,取黑质组织,通过Western blotting和qPCR方法检测两种取材方法黑质中酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)的含量。随后通过向小鼠黑质立体定位注射AAV-α-synuclein病毒载体建立PD模型组,脑片定位取材方法获取黑质,应用RNA测序和qPCR检测该取材方法能否有效反应PD相关基因的改变。[结果]脑片定位取材组1～6片脑片中,4号脑片TH蛋白含量显著高于组织定位取材组5.98倍(24.03±1.823vs4.018±3.675)及1号、2号、6号脑片(1;3.841±4.333;2.23±1.494);富集3、4、5号脑片提取RNA,其Th基因表达水平高于组织定位取材组2.3倍(2.303±0.4162vs1)及1、2、6号脑片富集组4.04倍(2.303±0.4162vs0.5746±0.0812)。在PD小鼠模型中富集3、4、5号脑片,转录组测序结果提示,多巴胺神经元相关基因下调,免疫功能相关基因上调,qPCR验证了PD模型黑质中Th和Aldh1a7表达水平显著下降(0.9018±0.138vs0.2854±0.09;1.031±0.3262vs0.1703±0.07989),CD180和Ddx60表达水平显著增加(1.008±0.1556vs4.597±1.586;1.007±0.1417vs12.94±2.776)。[结论]相较于组织定位取材方法,脑片定位取材能够更准确的提取到黑质组织,并且能够有效捕捉到多巴胺能神经元的丢失情况以及PD相关基因的改变,对于检测PD动物模型中的细胞和分子变化的精准性具有重要意义。
